基因转染之磷酸钙-DNA共沉淀技术实验原理:核酸以磷酸钙-DNA共沉淀物的形式出现时可使DNA附在细胞表面利于细胞吞入摄取或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内进入细胞的DNA仅有15可以进入细胞核中其中仅有不到1的DNA可以与细胞DNA整合在细胞中进行稳定表达基因转导的频率大约为10-4这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究此方法对于贴壁细胞转染是最常用并
磷酸钙共沉淀转染法实验原理将大分子转导至真核细胞中 :转染研究真核基因的表达和调控 重组DNA 病毒感染法外源基因大小有一定限制;安全性 显微注射法 不适合大量细胞的基因导入 电穿孔法 高水平(50%或更高)的毒性 DEAE-葡聚糖转染法仅限于瞬时转染 脂质体转染法试剂较昂贵磷酸钙转染法基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。
细胞转染一、实验目的:学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法酸钙沉淀法介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。二、实验方法原理:酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法,磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞,被转染的DNA可以整合到靶
磷酸钙转染法通过DNA,氯化钙与磷酸缓冲液混合,沉淀形成包含DNA且极小不溶的磷酸钙颗粒。这些磷酸钙-DNA复合物黏附到细胞膜并通过胞饮作用进入细胞中。 Human embryonic kidney (HEK) 293TGFP-Axin ( 3μg )2M CaCl22×HBS (pH 705) 材料方法 转染前24h,通过胰酶消化收集细胞,用适当的完全培养基DMEM以5×104至2×105细胞/
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化学沉淀脱氟固相法生产粒状磷酸一二钙技术张 国[简介]张国(1971—)男云南昆明人助理工程师长期从事磷酸氢钙生产技术管理工作(云南磷化有限云南 昆明 650600) [摘 要] 用二水湿法磷酸不经浓缩采用化学沉淀法脱氟固相法生产粒状饲料级磷酸盐(MDCP)介绍该工艺生产原理基本工艺流程主要设备工艺控制指标该工艺能耗低流程短适应性强 [关键词] 湿法磷酸粒状饲料级磷酸盐生
染色质免疫共沉淀技术(ChIP)及与芯片方法的结合功能基因组学(Functional genomics)是利用结构基因组所提供的信息和产物发展和应用新的实验手段通过在基因组或系统水平上全面分析基因的功能使得生物学研究从对单一基因或蛋白质的研究转向多个基因或蛋白质同时进行系统的研究它的研究内容是人类基因组DNA序列变异性研究基因组表达调控的研究陌生生物体的研究和生物信息学的研究等目前功能基因组学的研
第32 卷第6 期
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楼上说的准确的叫Co-IPIP就是免疫沉淀没有共哈哈 其实楼主的意思是既然有Pyk2 and p-Pyk2的抗体直接检测western就可以了为什么还要用IP以后的样品来检测这是因为p-Pyk2商业化的抗体特异性不好可能对p-FAK或其他类似的磷酸化蛋白有交叉所以我们一般为了准确性看其磷酸化的变化就先单独把这个蛋白免疫沉淀出来在用4G10抗体来检测而且这个方法看的是Pyk2蛋白全部的磷酸化位
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