双酶切连接反应的经验1 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近必须注意酶切顺序因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割有的酶要求识别序列两端有多个碱基的则必须先切否则就可能造成酶切失败2 回收PCR产物:回收的PCR产物片段=1:10 一般取前者后者取pmol为单位的DNA转换为为g单位的DNA:(X pmoles×长度bp×650) 1000000 (注:
前一阵子一直在做双酶切质粒重组失败了 很多次不过很快改善了 实验方法用2周重组了 14个质粒现就自己的体会谈一下质粒重组的一些个人经验1回收PCR产物:在进行PCR扩增时候给引物两端设计好酶切位点一般说来限制酶的 选择非常重要尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶如BamHIHindIII提前看好各的双切酶所用公用的BUFFER以及各酶在公用BUFFER里的效率选好酶切位点后在各个酶的两边
双酶切buffer的选择:1U :Supplied with its own unique reaction buffer that is different from the four standard NEBuffers. Itspatibility with the four standard NEBuffers is indicated by the chart.2BSA :
双酶切概述 双酶切反应 (Double Digests) 1同步双酶切 同步双酶切是一种省时省力的常用方法选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步NEB每一种酶都随酶提供相应的最佳NEBuffer以保证100的酶活性NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液里的活性表》及每支酶的说明书能在最大程度上保证两种酶活性的缓冲液即可用于双酶切由于内切
质粒DNA酶切连接转化筛选鉴定? (2011-04-29 10:42:22) javascript: ▼质粒DNA酶切连接转化筛选鉴定实验目的1学习和掌握限制性内切酶的特性2掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法3掌握利用CaCl2制备感受态细胞的方法4学习和掌握热击法转化的原理和方法5掌握α互补筛选法的原理6学习用试剂盒提取重组质粒DNA的方法7复习琼脂糖凝胶电泳的原理及方法实
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Double Digestion(双酶切反应)时Universal Buffer(通用缓冲液)的使用表■ 说明使用二种酶同时进行DNA切断反应 (Double Digestion) 时为了节省反应时间通常希望在同一反应体系内进行TaKaRa采用Universal Buffer表示系统并对每种酶表示了在各Universal Buffer中的相对活性尽管如此在进行Double Digestion
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