PCR常见问题分析及对策(无扩增产物非特异性扩增拖尾假阳性) 问题1:无扩增产物 现象:正对照有条带而样品则无 原因: 1.模板:含有抑制物含量低 对样品不合适 3.引物设计不当或者发生降解 4.反应条件:退火温度太高延伸时间太短 对策: 1.纯化模板或者使用试剂盒提取模板DNA或加大模板的用量 2.更换Buffer或调整浓度 3.重新设计引物(避免链间二聚体和链内二级结构)或者换一管新引物 4.
琼脂糖凝胶电泳常用于临床检测(定性)聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好条带比较集中可用于科研及检测分析二甲苯青:水溶液呈兰色电泳时其迁移速率与双链线性DNA大致相当指示剂一般与蔗糖甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液作用:①增加样品密度使其比重增加以确保DNA均匀沉入加样孔内②在电泳中形成肉眼可见的指示带可预测核酸电泳的速度和位置③使样品呈色使加样操作更方便普通电泳仪高压电泳仪紫外仪上观察电泳带及其
PCR(Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤:(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下以目的DNA为模板
PCR扩增产物的电泳分析 凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种. 一琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便快速最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为6265℃溶解后在37℃下维持液体状态约数小时主要用于DNA片段的回收质粒与外源性DNA的快速连接等.(一)凝胶浓度:凝胶浓度的
聚合酶链式反应(PCR)及酶切鉴定转化产物 一、实验目的二、实验原理三、实验试剂四、实验步骤五、注意事项讲授内容学习和掌握PCR的基本原理和实验技术学习和掌握限制性内切酶双酶切鉴定转化产物的基本原理和实验技术掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和实验技术一、实验目的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种通过体外酶促反应大量、快速、选择性地合成目的DNA片段的核
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR基因扩增一实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术二实验原理PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法由美国人B.Mullis于1983年发明包括三个基本步骤:变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链退火(Ann
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聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段一实验目的1.学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法2.理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性3.了解引物设计的一般要求二实验原理多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR ):原理类似于DNA的变性和复制过程即在高温(93-95℃)下待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板而后在低温(3765℃)情况下
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR常见问题原因分析及其对策主讲人:欧阳志荃PCR技术简介PCR常见问题原因分析及其解决方案提高PCR反应特异性的策略主讲内容PCR技术简介PCR标准反应体系 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH2O 耐热聚合酶反应体系对PCR扩增的影响DNA模板纯度 蛋白多糖酚类等杂质会抑制PCR反应完整性 模板降
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