实验五细胞核与线粒体的分级分离上海交大生命学院2012年7月一、学习目的学习组织细胞破碎的技术方法。了解细胞分离技术的方法原理。熟悉高速离心机的使用方法。掌握细胞核与线粒体的快速染色方法。在显微和超微结构水平上的形态观察和细胞化学方法为了解细胞和细胞器的结构与功能提供了不少,但是,要深入了解细胞和细胞器的功能活动,还必须分离各种细胞结构成分,研究它们的化学组成、酶活性和代谢特点。细胞成分分
实验五细胞核与线粒体的分级分离上海交大生命学院2012年7月一、学习目的学习组织细胞破碎的技术方法。了解细胞分离技术的方法原理。熟悉高速离心机的使用方法。掌握细胞核与线粒体的快速染色方法。在显微和超微结构水平上的形态观察和细胞化学方法为了解细胞和细胞器的结构与功能提供了不少,但是,要深入了解细胞和细胞器的功能活动,还必须分离各种细胞结构成分,研究它们的化学组成、酶活性和代谢特点。细胞成分分
1了解细胞器分离的一般原理与方法2掌握分级分离的原理和注意事项3观察叶绿体的自发荧光和次生荧光4熟悉线粒体的分离方法以及詹纳斯绿B 超活染色的方法1)取上一实验步骤5中获得的上清夜装入干净的离心管中在高速冷冻条件下10000 rmin 离心10 min 沉淀即为线粒体2)留适量溶液将沉淀悬浮即用 M NaCl溶液3)取一滴悬浮液于载玻上用一滴1詹纳斯绿B染液染色时间为5-10 mi
实验十六 细胞核与线粒体的分级分离 (选做综合性实验8学时)实验原理细胞内不同结构的比重和大小都不相同在同一离心场内沉降速度也不相同根据这一原理常用不同转速的离心法将细胞内各种组分分级分离出来分离细胞器最常用的方法是将组织制成匀浆分级分离和分析三步这种方法已成为研究亚细胞成分的化学组成理化特性及其功能的主要手段实验原理分级分离(Fractionation)由低速到高速离心逐渐
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实验六 线粒体和细胞核的制备与观察细胞内线粒体的超活染色与观察细胞生物学实验实验目的掌握用差速离心法分离动物细胞核及线粒体的技术掌握分级分离细胞核与线粒体的纯度检测方法学习线粒体活性染色技术, 观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布 了解密度梯度离心法纯化线粒体的方法实验原理制备线粒体及细胞核采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法悬浮介质通常采用一定pH的缓冲蔗糖溶液,它较接近细胞质的分散相,在
1.器具:玻璃匀浆器低速离心机高速冷冻离心机天平普通光学显微镜 ml Ep管载玻片10 ml滴管冰盒冰块滤网染缸20 ml烧杯2.材料:大白鼠3.试剂:生理盐水PBS molL的蔗糖溶液 molL蔗糖- mmolL Mg(Ac)2溶液 molL蔗糖- mmolL Mg(Ac)2溶液95乙醇甲基绿-派洛宁染液丙酮的詹纳斯绿B第二次:1300rpm8min弃上清
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验六 细胞核和线粒体的荧光观察一实验目的学习荧光显微镜的工作原理及使用方法了解荧光探针Rhodamine 123 和Hoechst33342 与细胞成分的结合特性和光谱特性二实验原理1.荧光显微镜 细胞参量荧光探针 吸收发射 nm特性DNA和RNAPropidum iodide(PI) 535617 红色荧光
实验三 线粒体和细胞核的制备与观察细胞内线粒体的超活染色与观察细胞生物学实验实验目的掌握用差速离心法分离动物细胞核及线粒体的技术掌握分级分离细胞核与线粒体的纯度检测方法学习线粒体活性染色技术, 观察活细胞内线粒体的形态、数量与分布 了解密度梯度离心法纯化线粒体的方法实验原理制备线粒体及细胞核采用组织匀浆在悬浮介质中进行差速离心的方法悬浮介质通常采用一定pH的缓冲蔗糖溶液,它较接近细胞质的分散相,在
实验原理
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