原核表达步骤目的片段连接上pET系列质粒后通过测序确定编码序列的准确性(T7通用引物)。 ://对编码序列进行稀有密码子分析。在线网页 对稀有密码子较多(一般大于15%)的载体建议使用Transetta(DE3)化学感受态细胞进行转化对稀有密码子较少的构建载体使用BL21(DE3)化学感受态细胞转化感受态细胞之后涂板(含抗生素的培养基,一般是卡纳或氯霉素),过夜培养后挑单克隆进
SlMPK20 融合蛋白的原核诱导表达与纯化① 将阳性 pET32a(+)SlMPK20 大肠杆菌菌种 Rosetta 划板活化;挑单菌落于含 100mg·L-1 氨苄( Amp)和 50 mg·L-1 氯霉素( CM)的液体 LB 中扩繁, 37 ℃, 200rpm,过夜;② 取 100 μl 扩繁的菌液于含相应抗生素的 30 mL 液体 LB 中摇约 25 h, 37 ℃, 200rp
原核表达步骤目的片段连接上pET系列质粒后通过测序确定编码序列的准确性(T7通用引物)。 ://对编码序列进行稀有密码子分析。在线网页 对稀有密码子较多(一般大于15%)的载体建议使用Transetta(DE3)化学感受态细胞进行转化对稀有密码子较少的构建载体使用BL21(DE3)化学感受态细胞转化感受态细胞之后涂板(含抗生素的培养基,一般是卡纳或氯霉素),过夜培养后挑单克隆进
分离胶:浓缩胶:SDS-试剂(1)30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺(30%凝胶贮液):292g丙烯酰胺,08g甲叉双丙烯酞胺溶于终体积为100ml的去离子水中,置于棕色瓶中4℃保存(2)15mol/L Tris-Cl(pH88):1815gTris碱,溶于去离子水中,浓盐酸调pH至85,定容至100ml(3)l0mol/LTris-Cl(PH68):6gTris碱,溶于去离子水中,浓盐酸调pH至
原核表达 将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达这种方法在蛋白纯化定位及功能分析等方面都有应用大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点:易于生长和控制用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择但是在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化磷酸化等翻译后加工常形成包涵体而影响表达蛋白的生
地理信息与旅游学院地理信息科学专业实验报告(2014 2015 学年 第 一 学期)课程名称: ArcGIS Server 应用与开发 班级: 地信121 : 汪亚雨 : 2012210586 指导老师: 王本林实验名称ArcGIS Server控件练习实验时间20141130实验地点地信楼410实验成绩实验目的熟练掌握ArcGIS Server相关控件的使用。
金字塔原理与书面表达 培训目标 提高思考和表达能力 学习五大类28种书面及口头表达的逻辑思路模板:总结类 工作计划 工作总结 项目汇报 述职报告 竞聘晋升方案类 业务方案 活动方案 营销方案 产品说明书 技术规格书需求说明书 销售话术 建议书 投标书 说明书报告类 调研报告 分析报告 立项报告 可行性研究报告 投资研究报告 审计报告日常类 讲话稿 请示 通
原核表达体系的构建刘华彬董浚键一实验材料(1)植物材料:拟南芥(2)载体及菌株:克隆及测序用载体为pMD18-T购自Takara宿主菌DH5α原核表达载体(pET30c )(3)PCR引物:登陆GeneBank查找目的基因序列以目的基因序列为模板设计引物(4)药品试剂:反转录试剂盒(TaKaRa)质粒小提试剂盒(TIANGEN)胶回收试剂盒Taq DNA聚合酶(TaKaRa)dNTPs(TaK
提取原核表达蛋白Protocol李卫红2016-7预实验:Rosseta菌,37℃试管摇菌,过夜;第二天将菌液全部加入到100mlLB中(载体抗性:氯霉素,kana),37℃摇菌(约1-2小时后)测OD值:06-08;取1ml做诱导前对照,四度保存(跑蛋白胶前直接取样加loading buffer);加入一定体积01M IPTG(终浓度为01mM);(也可设计一系列浓度梯度和处理时间,寻找最适浓
植物蛋白的提取1 取冻存的植物材料2 g,加入液氮研磨成粉末;2 加入适量(材料:提取液=1:15)蛋白提取缓冲液,冰上孵育30 min;蛋白提取缓冲液:试剂用量Tris-MES(05M, pH = 80)10 mLEDTA(05M, pH = 80)2 mLSucrose17115 gMgCl2(1 M)01 mLDTT(1 M)05 mLddH2O补至
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