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实时荧光定量PCR (RT-PCR)关键词:实时荧光定量PCR RT-PCR原理 荧光阈值 Ct值 标准曲线的绘制 荧光扩增曲线一 实时荧光定量PCR在PCR反应中无论是定性还是定量分析分析的都是PCR的终产物但是有时候想知道的却是未经PCR放大之前的起始模板量RT-PCR应用而生原理 图1 原理图 图2 Taqmen 探针如
实时荧光定量PCR原理 所谓实时荧光定量PCR技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 1. Ct 值的定义 在HYPERLINK :baike.baiduview893953.htm荧光定量PCR技术中有一个很重要的概念 -- Ct值C代表Cyclet代表thresholdCt值的含义
实时定量PCR数据分析所谓的实时荧光定量 PCR 就是通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析在实时荧光定量 PCR 反应中引入了一种荧光化学物质随着 PCR 反应的进行PCR 反应产物不断累计荧光信号强度也等比例增加每经过一个循环收集一个荧光强度信号这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化从而得到一条荧光扩增曲线RT-qPCR是由三个步骤
Real-time PCR for mRNA quantitation一、原理实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量PCR产物的目的,目前该技术已在动植物基因工程,微生物和医学领域中得到广泛应用。实时定量PCR包括探针法和染料法两种,探针法是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加,特异性高,如Taq ManTM技术;染料法则是利用染料来指示扩增的增加,特异性
实时荧光定量PCR简介荧光定量PCR检测技术从诞生到现在已经有 8 年了但是其应用在近四年才迅猛增长在 Medline 数据庫中用 Taqman 或 real time PCR 作为关键词检索在1996 年仅有 19 篇在 1997 年仅有 28 篇在 98 99 2000 年分别达到了 52 157 409 篇 2003 年已经达到2984 篇相信在不久的将来会有更多的文章发表针对实
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利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化最终精确地对起始模板定量分析阈值(Xn):荧光扩增曲线指数扩增期的荧光强度标准(PCR扩增产物量的标准)C(t)值(n):荧光信号(扩增产物)到达阈值时所经过的扩增循环次数常用荧光检测方法SYBR非特异性TaqMan特异性与扩增的片断配对熔解曲线分析定量和检测目标基因双标准曲线法结果精确对扩增效率要求不高构建目标基因与内标基因的标
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