限制性内切酶酶切注意事项??? 在进行限制性酶切反应过程中影响限制性酶切反应效果的因素较多要设计酶切反应一般均应考虑诸如酶切系统温度条件反应体积底物性质及星型反应等因素根据各种不同的条件酶切反应的设计一般应注意以下问题:1. 大多数限制酶贮存在50甘油溶液中以避免在-20℃条件下结冰当最终反应液中甘油浓度大于12时某些限制酶的识别特异性降低从而产生星活性更高浓度的甘油会抑制酶活性因此加入反应的酶体
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The Type II restriction systems typically contain individual restriction enzymes and modification enzymes encoded by separate genes. The Type II restriction enzymes typically recognize specific DNA se
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酶切位点保护碱基-PCR引物设计用于限制性内切酶发布: 2010-05-24 20:19 来源:生物吧 编辑:刘浩 查看: 161 次??本文给出了分子克隆中常用限制性内切酶的保护碱基序列如AccIAflIIIAscIAvaIBamHIBglIIBssHIIBstEIIBstXIClaIEcoRIHaeIIIHindIIIKpnIMluINcoINdeINheINotINsiIPac
2. 限制性核酸内切酶的命名法二琼脂糖凝胶电泳实验原理内切酶活性下降内切酶稀释不正确DNA不纯反应条件不佳内切酶识别的DNA位点上的碱基被甲基化或存在其它修饰部分DNA溶液粘在管壁上内切酶溶液粘度大取样不准酶切后DNA粘末端退火由于反应溶液温度强烈振荡使内切酶变性过度稀释使酶活性降低反应条件不适识别位点两侧插入了可影响酶切效率的核酸顺序检查反应条件:甘油浓度大于12盐度过低Mn2的存在及酶:DN
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA二分非对称5-7 bp 非对称实验材料和试剂反应 10×缓冲液2μL限制性内切酶用量可按标准体系1μg DNA加1单位酶消化1-2h但要完全酶解则必须增加酶的用量一般增加2-3倍甚至更多反应时间也要适当延长 酶切时所加的DNA溶液体积不能太大否则DNA溶液中其他成分会干扰酶反应 许多实验制备的D
AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点 AscI识别位点 AseI识别位点
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限制性内切酶酶切位点汇 : : AatII识别位点 Acc65I识别位点 AccI识别位点 AciI识别位点 AclI识别位点 AcuI识别位点 AfeI识别位点 AflII识别位点 AflIII识别位点 AgeI识别位点 AhdI识别位点 AleI识别位点 AluI识别位点 AlwI识别位点 AlwNI识别位点 ApaI识别位点 ApaLI识别位点 ApeKI识别位点 ApoI识别位点
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