蛋白透析实验使用前处理: 1 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。 2 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 80)中将透析袋煮沸10分钟。 3 用蒸馏水彻底清洗透析袋。 4 放在 1mmol/L EDTA(pH 80)中将之煮沸10分钟。 5 冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。 6 用前在透析袋内装满水
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 实验11 蛋白质的透析 一实验目的学习透析的基本原理和操作 二实验原理蛋白质是大分子物质它不能透过透析膜而小分子物质可以自由透过在分离提纯蛋白质的过程中常利用透析的方法使蛋白质与其中夹杂的小分子物质分开 三器材1透析管或玻璃纸2烧杯3玻璃棒4电磁搅拌器5试管及试管架四试剂1蛋白质的氯化钠溶液 3个除去卵黄的鸡卵
附:
几个 要求:活性蛋白的回收率高正确的复性的产物易于与错误的折叠蛋白质分离折叠复性后应得到浓度较高的蛋白质产品复性过程耗时少 复性缓冲液的pH要远离等电点离子强度不易过高10-50mmolL离子强度太高蛋白质易发生沉淀也不利于离子交换层析的分离复性液温度不易过高在4℃-10℃较合适对于耐热蛋白也可以室温复性复性时间以天然表达的重组蛋白复性应在6hr以上 复性时
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蛋白酶活性的测定方法(GB/T23527-2009)1 原理 蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷物蛋白等都有很好的水解作用。磷钨酸和磷钼酸混合试剂,即福林-酚试剂,碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钨兰和钨兰混合物)。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸),因此,蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋白酶分解酪素(底物)生成含酚基氨基酸的呈色反应,来间接测定蛋白
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W——试样重量mgM——试样水分百分率双试验结果允许差:粗蛋白质含量在以下时不超过粗蛋白质含量在以上时不超过求其平均数即为测定结果测定结果取小数点后第一位注:①消化过程中若硫酸损失过多时可酌量补加硫酸勿使瓶内干涸②消化液加水稀释后应及时进行蒸馏否则应保存消化液临用时加水稀释③加入蒸馏瓶1内的碱液必须过量④也可使用由甲基红乙醇溶液1份和溴甲酚绿乙醇溶液5份配制的混合指示剂(临用时混合)终点为灰红色附
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