实验九质粒提取实验目的: 1了解碱裂解法提取质粒的基本原理2掌握质粒提取的基本操作步骤 实验原理质粒提取关键: 基因组DNA与质粒DNA的有效分离大肠杆菌染色体DNA:约4700 kb质粒DNA: 如 pUC18:约注意事项:
掌握碱裂解法分离质粒DNA的基本原理和操作要点了解限制性内切酶作用的原理特点和酶切质粒DNA的试验方法学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术4X质粒提取过程必需缓和不能剧烈振荡操作过程避免污染反应体系中各试剂用量准确EB是一种诱变剂操作时必须戴塑料或乳胶手套
分子生物学实验质粒提取Plasmid ExtractionEP管(eppendorf管)操作(理论上无菌)量程可调的微量移液器使用溴乙锭,致癌!报纸区域为污染区1)取15ml过夜培养的菌液于EP管,9000rpm离心30秒(一起离),弃尽上清。2)用250μl溶液P1重悬沉淀,枪头反复抽吸至菌体彻底悬浮。3)加250μl溶液P2,温和地上下翻转4~7次使菌体充分裂解,室温放置3min,直到溶液变得
实 验 七 质粒DNA的提取和鉴定 目的 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA能从细菌中提出来又能再转入细菌这个过程称转化转入的质粒DNA仍能进行复制产生多个拷贝提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法煮沸裂解羟基磷灰石柱层析法质粒DNA释放法酸酚法等
质粒DNA的提取和纯化 郑敏生化与分子生物学系分子生物学从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递,基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能,以及细胞信号的转导等。 基因工程移液器和EP管质 粒质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,独立于染色体之外的、能自主复制的双链环状脱氧核糖核酸物质。质粒
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第一部分 碱裂解法提取质粒一实验目的通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒 提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 二实验原理 碱法提取主要是利用共价闭合环状质粒与线性染色质在拓扑学上的差异来分离它们在碱性pHDNA变性恢复中性时线性染色体DNA不能准确复性
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级质粒三种提取方法的比较基因工程原理与技术实验部分: 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子大小从1-200kb不等为双链闭环的DNA分子并以超螺旋状态存在于宿主细胞中质粒主要发现于细菌放线菌和真菌细胞中它具有自主复制和转录能力能在子代细胞中保持恒定的拷贝数并表达所携带的遗传信息 在细菌细胞内共
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验 一质粒的提取(碱法)实验目的1.了解碱法提取质粒的原理2.掌握碱法提取质粒的方法实验原理质粒是一种细菌染色体外的具有自主复制能力的共价闭合环状超螺旋结构的小型DNA分子载体碱法提取质粒是实验室最常用的质粒提取方法之一提取量较大便于操作这种方法是根据共
实验一质粒的提取(碱法)3学时 实验目的 实验原理实验仪器、材料与试剂实验步骤实验结果及讨论 实验目的了解碱法提取质粒的原理;掌握碱法提取质粒的方法。实验原理质粒是一种细菌染色体外的、具有自主复制能力的、共价闭合环状超螺旋结构的小型DNA分子。碱裂解法提取质粒是实验室常用的方法。这种方法是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。结构的三大要素:多克隆位点选择标记(
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