逆转录PCR由一条RNA单链转录为互补 \t _blank DNA(cDNA)称作“逆转录”,由依赖RNA的 \t _blank DNA聚合酶(逆转录酶)来完成。随后,DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成,随每个循环倍增,即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶 H降解,留下互补DNA。 可以检测很低拷贝数的RNA。RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断,并
PCR和RT-PCR技术PCR基础聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列这是一个指数增长的过程因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术一般经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到反应包括几个成分(表1)模板可以为纯化的基因组或质粒DNA由RNA转化得到的cDNA或未经纯化的粗制生物样品如
PCR和RT-PCR兰州大学 王映珍PCR和RT-PCR基础PCR基础 聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列这是一个指数增长的过程因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术一般经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到反应包括几个成分(表1)模板可以为纯化的基因组或质粒DNA由RN
RT-PCR步骤点击次数: 6795? :孙振刚 发表于:2009-04-24 00:00 请注明来自丁香园 来源: HYPERLINK :.dxy 丁香园?一总RNA提取1. 取200mg组织放到1.5mlEP管中加入1mlTrizol剪碎2. 震荡30s3. 加0.2ml氯仿剧烈摇动30s室温3min4. 12000×g4℃离心15min5. 吸上层无色
RT-PCR步骤RNA提取(-70℃保存)组织剪碎加入1ml Trizol冰上匀浆(边匀浆边暂停)转入一新EP管中(1.5ml)室温保存5min加氯仿0.2ml振荡混合(手摇剧烈)室温放置5min10000 rpm 4℃离心15min转移上层水相(吸70)到一新EP管中加异丙醇0.5ml振荡混合室温保存10min12000rpm 4℃ 离心15min倒掉上清加1ml 75无水乙醇(4℃保
PCR和RT-PCR基础兰州大学 王映珍PCR基础 聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列这是一个指数增长的过程因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术一般经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染色的凝胶上观察到反应包括几个成分(表1)模板可以为纯化的基因组或质粒DNA由RNA转化得到的cDNA
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RT-PCR实验心得■ 提取RNA(我做细胞的)1.取中号培养瓶(100ml培养瓶 注:此时细胞汇合度≥80)用PBS洗细胞两次弃尽PBS后加2mlTRIzol(量大无防)?细胞用用吹打管吹至液体澄清且无细胞团块转至2个1.5EP管中.2.颠倒摇晃10下室温5分钟.3.在2个EP管中各加入0.2 ml氯仿盖紧样品管盖用手用力摇晃试管15秒并将其在30°C下孵育2—3分钟4.在2—8°C下用
RT-PCR技术RT-PCR简介 RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术可以检测很低拷贝数的RNART-PCR广泛应用于遗传病的诊断并且可以用于定量监测某种RNA的含量(检测基因表达的方法参见Northern Blot法) RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)为了与逆转录PCR相区别通常被写作定量PCR(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(re
PCR和RT-PCR常见问题及解答:未知???来源:本站???2004-12-21点击: 6799??? 【字体: javascript:fontZoomA() 小 javascript:fontZoomB() 大】问 题可能原因建议解决方法RT-PCR灵敏度:在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物RNA被降解在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污
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