摘要 酶的体外定向进化是蛋白质工程的新策略. 不需事先了解酶的空间结构和催化机制 而是通过模拟自然进化机制以改进的诱变技术结合确定进化方向的选择方法在体外改造酶基因定向选择有价值的非天然酶. 短期内可以在试管中完成自然界需要几百万年的进化过程因此可能是发现新型酶和新的生理生化反应的重要途径. 关键词 蛋白质工程 模拟 定向进化 -----------------------------------
酶的进化主要不是表现为某个酶分子的活力和稳定性的不断提高而是在于生物整体的适应能力调控能力的增强因此通常只要求酶在生物体内对特定的生物学功能有专一性 与自然进化相比酶分子的定向进化过程完全是在人为控制下进行的使酶分子朝向人们期望的特定目标进化定向进化过程的原理理性的(Rational)定点突变(site-specific mutagenesis或site-directed mutagenes
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第35 卷 第1 期
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第 25 卷第 1 期
超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定方法一试剂1. 0.1molL HCl 2. 10mmolL HCl 3. 0.1molL Tris标准溶液:12.114g三羟甲基氨基甲烷溶于蒸馏水并定容至1000ml.4. 50mmolLTris缓冲溶液:50ml0.1molL Tris标准溶液中加入0.1molL HCl 19.922.0ml定容至100mlPH为8.205. 30mmolL邻苯三
蛋白酶定义1g固体酶粉(或1ml液体酶)在一定温度和pH值条件下1min水解酪素产生1μg酪氨酸为一个酶活力单位以ug(uml)表示福林法(第一法) 原理蛋白酶在一定温度与pH条件下水解酪素底物产生含有酚基的氨基酸(如:酪氨酸色氨酸等)在碱性条件将福林试剂(Folin)还原生成钼蓝与钨蓝用分光光度法测定计算其酶活力 试剂和溶液.1 福林试剂的制备于2000ml磨口回流装置中加入钨酸钠(Na2W
测定方法:硝酸还原酶(NR)测定:试剂: a.1μg/ml 的NaNO2标准液:09857g定溶到1 L,再吸取5ml定容到1L. b.01mol/L PH 75 的磷酸缓冲液:Na2HPO4·12H2O 300905g +·2H2O 24965g 定溶到1 L c.1% 磺胺溶液:1 g磺胺溶于100ml 3 mol/L 的 HCl中(25ml CHl定溶到100ml) d.002% 萘基乙
参考文献:关松荫等编著. 土壤酶及其研究法[M]. 农业出版社1986.周礼凯编著. 土壤酶学[M]. 科学出版社关松荫等1986蔗糖酶:比色法(1) P274-276脲酶:比色法 P294-297蛋白酶:比色法9(1) P302-304磷酸酶:磷酸苯二钠法(2) P312-313过氧化氢酶:容量法 P323蔗糖酶 比色法试剂 (1)
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