实验20 质粒DNA的提取与鉴定授课题目:质粒DNA的提取与鉴定(6学时)授课对象:生科专业授课教师: 教学目标及基本要求:1学习和掌握快速提取质粒DNA的原理和方法2学习和掌握质粒DNA的鉴定3采用开放性实验教学教学内容提要及时间分配:1实验原理讲解: 8分钟?碱变性法提取质粒DN
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质粒DNA的提取和鉴定 实验二十四目的掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法;煮沸裂解;羟基磷灰石柱层析法,质粒DNA释放法;酸酚法等。概括起来主要是用非离子型或离子型去污剂、有机溶剂或碱进行处理及用加热处理所有分离质粒DNA的方法都包括3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增;收集和裂解细菌;分离质粒DNA(有时还要求纯化质粒DNA,根据实验所需)选择哪一种方
质粒DNA的提取、纯化与鉴定南通大学江苏省神经再生重点实验室蒋茂荣 一、基因克隆的质粒载体1、定义 双链闭环DNA; 1kb--200kb; 独立存在于宿主染色体之外; 具复制起始点; 复制和转录不同程度依赖于宿主基因; 编码某些酶,使宿主具有特殊标志, 可供选择。2、载体性质(1)复制能力;(2)容纳外源DNA的能力;(3)选择标记:抗生素耐受。(4)引入多克隆位点;(5)引入重组选择标记。3、
质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键:基因组DNA与质粒DNA的有效分离 (碱裂解法) 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性同时沉淀蛋白质再将pH值调至中性质粒DNA较小很容易复性成双链而染色体DNA较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项:实验方法 碱裂解法 1挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB(含Amp 100μgml)37℃ 振荡培养过夜(12
实 验 七 质粒DNA的提取和鉴定 目的 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA能从细菌中提出来又能再转入细菌这个过程称转化转入的质粒DNA仍能进行复制产生多个拷贝提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法煮沸裂解羟基磷灰石柱层析法质粒DNA释放法酸酚法等
质粒DNA的提取和纯化 郑敏生化与分子生物学系分子生物学从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递,基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能,以及细胞信号的转导等。 基因工程移液器和EP管质 粒质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,独立于染色体之外的、能自主复制的双链环状脱氧核糖核酸物质。质粒
实验五阳性克隆鉴定和质粒DNA提取 【实验目的】学习大肠杆菌转化阳性克隆的鉴定学习碱法提取质粒DNA的方法和技术 【实验原理】重组质粒转化大肠杆菌宿主细胞后,还需要对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体(如pUC系列)都带有一个大肠杆菌DNA的短区段,其中含有β-半乳糖苷酶基因(LacZ)的调控序列和β-半乳糖苷酶α肽链氨基端(146个氨基
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DNA的粗提取与鉴定教学目的1.初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法2.观察提取出来的DNA物质实验原理在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的DNA在0.14molL的NaCl溶液中的溶解度最低据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出不溶于酒精溶液但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液据此可提取杂质较少的DNA二苯胺蓝色(用于DNA的鉴定)实验步骤1.材料制备柠檬酸钠100ml 500ml
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