众所周知21世纪最具发展潜力的两大产业是信息技术(IT)和生物技术信息技术发展迅猛并已渗透到社会生活的各个角落有关信息技术的报道——多媒体互联网信息全球化等不但频频亮相于媒体而且与我们的日常生活息息相关而与IT的轰轰烈烈相比生物技术看起来却平平淡淡虽然基因克隆人类基因组计划生物多样性等字眼经常见诸报端但离我们的生活似乎还很遥远所以也有专家这样评论：20世纪不是生物技术的世纪而是生物工程蓄势待

主要步骤：1构建DNA重组分子2重组DNA分子引入宿主细胞和筛选鉴定3基因的表达限制酶切割并分离所需片断目的基因就是所需要克隆的外源基因制备方法：1人工合成法2逆转录法3用限制性内切酶直接从染色体DNA中分离4用PCR法扩增目的基因片段若所需基因较大人工合成有困难从组织中分离提取也不容易则可利用逆转录法合成该法是：以编码某特异多肽的mRNA为模板在逆转录酶的作用下反转录成该多肽mRNA的互补DNA

原核表达步骤 原核表达先要将基因克隆到原核表达载体上然后通过转化到JM109或BL21等菌株中诱导表达蛋白然后进行蛋白纯化本实验方案的前提是目的基因已克隆到载体并已转进入JM109菌株中鉴定目的蛋白是否在大肠杆菌JM109或BL21中大量表达制样1 . 挑取经过双酶切鉴定的单克隆菌落于700ul LB培养基加入0.7ul Amp(

拟南芥基因克隆的策略与途径拟南芥(Arabidopsis thaliana)是一种模式植物具有基因组小(125 Mbp)生长周期短等特点而且基因组测序已经完成(The Arabidopsis Genomic Initiative 2000)同时拟南芥属十字花科(Cruciferae)具有高等植物的一般特点拟南芥研究中所取得成果很容易用于其它高等植物包括农作物的研究产生重大的经济效益特别是十字

? Gateway也可以被视为一种克隆操作平台：把目的基因克隆到入门载体(Entry Vector)后就不用依赖限制性内切酶而靠载体上存在的特定重组位点和重组酶高效快速地将目的基因克隆到其它的受体载体(Destination Vector目的载体)上???? Gateway的原理也是建立在噬菌体DNA定点整合到细菌宿主基因组上在噬菌体和细菌的整合因子(INFInt)的作用下lambda的at

书 书 书中 国 生 物 工 程 杂 志 　 Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ Ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ２ ０ ０ ９ ２ ９ （ ７ ） ： ４ ３ ４ ９条 斑 紫 菜 Ｓ Ａ Ｍ Ｓ 基 因 克 隆 与生 物 信 息 学 分 析易 乐 飞１　 王 　 萍１　 周 向 红１　 刘 楚 吾２  （ １ 淮 海 工 学 院 江 苏 省 海 洋 生 物 技 术 重 点 实

2 010 2 4 3 490 494Jo u r n a l o f Nu c l e a r Ag r i c u l t u r a l Sc i e n c e s 1000-8551 2 010 03-0490-05 EBF2 1 2 1 2 1 2 1 2 1. 40003 0 2 . 40003 0 EBF2 R T-PCR cDNA EBF2 GFP pCambi a13 0

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农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 200614 (6): 884888基金项目：河南农业大学博士基金资助简介:涂洪涛 (1982)男硕士研究生E-mail： <>.通讯Author for correspondence.博士教授 主要研究方向： 昆虫生态学Tel:0371-63558170 E-mail： <>.收稿日期： 200

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用于噬菌体cDNA文库展示的载体互补DNA(cDNA)克隆基因的表达是基因分离与鉴定的一个极为有效的工具用于筛选的 HYPERLINK t _blank 核苷酸探针需要所感兴趣基因的原始序列信息而对于表达cDNA文库的筛选只需要一个天然的配体或一个特异的 HYPERLINK t _blank 抗体(单克隆或多克隆)作为探针体外筛选入噬菌体或质粒展示的cDNA文库要将翻译产物黏

3race5race技术服务一：简介cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends RACE)是通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术是基于PCR技术由已知的一段cDNA片段通过两端延伸扩增从而获得完整3和5端的方法无需构建cDNA文库可以短时间内获得目的基因cDNA序列以其简单快速廉价等优势而受到越来越多的重视主要应用于全长基因获取转录起始位点

基因克隆的本质是使目的基因在特定的条件下得到扩增和表达而目的基因本身无法进行复制和表达不易进入受体细胞不能稳定维持所以就必须借助于载体及其寄主细胞来实现作为基因克隆的载体必须具备以下特性：⑴载体必须是复制子⑵具有合适的筛选标记便于重组子的筛选⑶具备多克隆位点（MCS）便于外源基因插入⑷自身分子量较小拷贝数高⑸在宿主细胞内稳定性高（一）质粒载体的生物学特性（二）质粒载体的制备 （三）质粒载体的改造（

()(( - ()-.0) 1234 1 5222 2627 88 6 8 8 6 9: <( : 9: 4 3-= ( 9: < : 9: >89: ) 9: >89: >89:( >89: :A9 B: >89: 9: >89: 9: 9: 9: B6C D 86 2 8 418 2 - .010 9: E(. FG> 9: D8H

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 现代生物技术的概念 技术手段(种类)第一章 绪 论1第二章 基因工程(Gene Engineering)2基因工程的一般流程目的基因的获取载体的构建体外重组导入宿主细胞筛选及鉴定重组子3基因工程中常用的工具酶1.限制性内切酶2.连接酶3.末端修饰酶 4基因克隆载体的概念：作为基因克隆载体一般应具备的条件： (1)多克隆位

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因的克隆与表达基因克隆(gene cloning)基因表达(gene expression) -原核基因表达 -真核基因表达基 因 克 隆 Gene Cloning概述克隆载体受体细胞体外重组的策略基因克隆工作流程一概述确定了遗传信息的携带者即基因的盆子载体

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第三章 基因克隆载体(质粒载体)Review载体应具备的条件(P38) 1. 具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性(可转移性)2. 具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点3. 具有多种单一的酶切位点(多克隆位点)4. 具有合适的选择性标记 自我复制表达外源基因的插入不影响其功能的发挥易于从宿主细胞分离出来5. 分子量尽可能小

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 200614 (1): 7073基金项目：国家高技术研究发展计划(863计划 2003AA241170) 国家自然科学基金(30200169)王友华：男 1977年生博士 E-mail： <w_>.通讯 Author for correspondence. E-mail: <>.收稿日期： 2005-

基因工程期末复习第一章：基因工程1. 定义：通过基因操作来定向改变或修饰生物体或人类自身并具有明确应用目的的活动称为基因工程2. 基因工程研究的主要内容或步骤：基因克隆的通用策略 ：涉及的过程可用分合成切连转选鉴①从复杂的生物有机体基因组中经过酶切消化或PCR扩增等步骤分离出带有目的基因的DNA片段②在体外将带有目的基因的外源DNA片段连接到能够自我复制的并具有选择记号的载体分子上形成重组DNA分

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