动物基因组DNA的分离与核酸浓度的测定实验方法 先将小鼠肝脏进行预处理:断颈法处死一只小鼠采集肝脏组织用生理盐水清洗血污取一只小鼠的肝脏(约2g)加入20 mL匀浆缓冲液(STE buffer)用电动组织匀浆器匀浆至无明显组织块存在(最好冰浴操作)将组织细胞的匀浆液体转移至15 mL蓝盖离心管中4℃ 4000 rmin离心15 min弃上清留沉淀沉淀中加入6 mL消化缓冲液(含蛋白酶K)轻轻反转混
动物基因组DNA的分离实验目的:通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤分离纯化核酸总的原则: ①应保证核酸一级结构的完整性 ②排除其它分子的污染核酸纯化应达到的要求: ①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子 ②排除其它核酸分子的污染 ③其它生物大分子的污染应降低到最低程度 DNA提取的基本步骤1.材料准备2.破碎细胞或包膜-内容物
核酸分离纯化原则原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1molL氯化钠)但在氯化钠盐溶液中溶解度最低而核酸核蛋白(RNP)则在氯化钠中溶解度最大利用这一性质可将其分开方法:先用组织捣碎机将动物肝脏制成组织匀浆再用 氯化钠溶液把细胞中的 RNP 提取出来最后用酚将RNA和蛋白质分开地衣酚试剂材料:牛肝试剂: 氯化钠标准RNA溶液:100μgmL地衣酚(35-二羟基甲苯)
根据RNA与DNA在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离: 在的氯化钠溶液中RNA核蛋白溶解度大而DNA核蛋白溶解度小相反在1M的氯化钠溶液中DNA核蛋白的溶解度大而RNA核蛋白的溶解度小从而使DNA和RNA核蛋白分开然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白使核酸释放出来再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出达到分离DNA和RNA的目的3. 脱氧核糖的显色实验
动物基因组DNA的提取[实验原理]??? 在EDTA和SDS等去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提,可以得到哺乳动构基因组DNA,用此方法得到的DNA长度为100-150 kb,适用于L嘴菌体构建基因组文库和 Southern分析。????通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤,以及相对分子质量较大的DNA的 琼脂糖凝胶电泳技术。[仪器、材料与试剂](一)仪器1台式离心机2
DNA (脱氧核糖核酸) 主要存在于细胞核的染色体中 核外也有少量DNA如线粒体DNA(mtDNA)叶绿体DNA(cpDNA)质粒DNA RNA(核糖核酸) 存在于细胞质中如mRNA rRNA tRNA等 除上述DNARNA外还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体其或只含DNA或只含有RNA破碎组织细胞DNA的提取:苯酚抽提法采用吸附材料吸附的方式分离DNA时应提供相应的缓冲体系采用有机(酚氯
作用: 1.使蛋白质变性沉淀从核酸提取液中分离除去以防造成蛋白污染 2.使蛋白质变性故可使核糖体解聚释放出核酸 3.某些蛋白质变性剂也有抑制 RNase活性和破裂细胞的作用 提取1. 材料设备及试剂材料:冷冻或新鲜抗凝全血组织样设备:EP管微量取液器(20μl 200μl 1000μl) 台式高速离心机 涡旋振荡器试剂:裂解液 ligsis buffer(40mMT
动物基因组DNA的提取[实验原理]??? 在EDTA和SDS等去污剂存在下,用蛋白酶K消化细胞,随后用酚抽提,可以得到哺乳动构基因组DNA,用此方法得到的DNA长度为100-150 kb,适用于L嘴菌体构建基因组文库和 Southern分析。????通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤,以及相对分子质量较大的DNA的 琼脂糖凝胶电泳技术。[仪器、材料与试剂](一)仪器1台式离心机2
实验原理
分光光度法测定DNA的浓度和纯度【目的要求】:了解:分光光度法测定DNA浓度和纯度的原理 掌握:分光光度法测定DNA浓度和纯度的技术方法熟悉:分光光度法测定DNA浓度和纯度的实验操作步骤和注意事项【实验原理】:前面提取得到的DNA的浓度和纯度都是未知的在后续的DNA酶切连接及转化等实验中需要一定的浓度和纯度要求因此要测定DNA的浓度和纯度测定DNA的方法通常有:紫外分光光度法琼脂糖凝胶电泳法
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