利用实时定量 PCR技术通过2 -△△CT 方法分析相对基因表达差异Kenneth J. Livak and Thomas D. Schmittgen Department of Pharmaceutical Sciences College of Pharmacy. Washington State University Washington 99164-6534 现在最常用的两种分析实时定量
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第十七章 研究差异表达基因的相关技术基因的差异表达高等真核生物的基因组一般具有3000040000个基因而每一个细胞大约只表达其中的15基因在不同细胞间及不同生长阶段的选择性表达决
贵州农业科学2009,
实时定量PCR技术 定量PCR阈值与C(t)值C(t) value 初始模板量对数---C(T)循环数标准曲线浓度的对数值与循环数呈线性关系根据样品扩增达到域值的循环数(Ct值)就可分析样品中起始模板量化学试剂有104熔链曲线分析Tm适用范围验证试验样品扩增:正常vs肿瘤Multiplex Reactions: C(t)GAPDH表达故障排查---软件界面精密度高
Real-time PCR for mRNA quantitation一、原理实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量PCR产物的目的,目前该技术已在动植物基因工程,微生物和医学领域中得到广泛应用。实时定量PCR包括探针法和染料法两种,探针法是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加,特异性高,如Taq ManTM技术;染料法则是利用染料来指示扩增的增加,特异性
Array 的 用 途寻找样本之间在mRNA水平上表达差异的基因(已知)玻 片 产 品 种 类Human (3800个基因的80-base oligo)Human (1081 个基因的80-base oligo)Rat (1081 个基因的80-base oligo)Mouse (1081 个基因的80-base oligo)卖 点:无需同位素阳性率高对低表达量的RNA同样有效SMART
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实时荧光定量PCR(Real time Quantitative PCR)定义 在PCR反应体系中加入荧光基团利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 普通PCR与Real-time PCR的区别普通PCRR
实时定量PCR数据分析所谓的实时荧光定量 PCR 就是通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析在实时荧光定量 PCR 反应中引入了一种荧光化学物质随着 PCR 反应的进行PCR 反应产物不断累计荧光信号强度也等比例增加每经过一个循环收集一个荧光强度信号这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化从而得到一条荧光扩增曲线RT-qPCR是由三个步骤
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