第 13 卷 第 1 期
菌物研究2003 , 1 (1)
PCR 扩增不出或扩增效率低的解决方法对PCR退火温度进行梯度设置(例:55℃±10℃)根据TM值来选择最适温度确认模板是否存在降解问题适当调整模板引物聚合酶的量反应体系里补加甜菜碱(终浓度为1M)DMSO(总体积的1-5注:加过多会影响酶的活性)如果模板是菌液未扩增出的可选用所提的质粒再做PCR扩增 更换其他DNA聚合酶做小试实验(PfuFastpfuKOD)目前首选聚合酶为Pfu在扩增不出
《黑龙江畜牧兽医》科技版
PCR(Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤:(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下以目的DNA为模板
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级PCR基因扩增一实验目的通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术二实验原理PCR是一种由引物介导的选择性体外扩增DNA的方法由美国人B.Mullis于1983年发明包括三个基本步骤:变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链退火(Ann
利用PCR技术扩增目的基因主讲人 周洁深圳罗湖外语学校内容提要介绍PCR技术利用的原理条件和反应过程1. PCR:多聚酶链式反应是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术 2. 原理:DNA双链复制温故而知新DNA的两条链四种游离的脱氧核苷酸ATP解旋酶DNA聚合酶等——体内DNA复制需要的条件模板:原料:能量:酶: 高温变性(解旋为单链)低温复性(引物
聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段一实验目的1.学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法2.理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性3.了解引物设计的一般要求二实验原理多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR ):原理类似于DNA的变性和复制过程即在高温(93-95℃)下待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板而后在低温(3765℃)情况下
琼脂糖凝胶电泳常用于临床检测(定性)聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好条带比较集中可用于科研及检测分析二甲苯青:水溶液呈兰色电泳时其迁移速率与双链线性DNA大致相当指示剂一般与蔗糖甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液作用:①增加样品密度使其比重增加以确保DNA均匀沉入加样孔内②在电泳中形成肉眼可见的指示带可预测核酸电泳的速度和位置③使样品呈色使加样操作更方便普通电泳仪高压电泳仪紫外仪上观察电泳带及其
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