四 川 大 学硕士研究生课程考试试卷名姓陈斌所在院(系所)生命科学院专 业细胞生物学S101671考试课程基因工程原理课程号考试方法试题综述学分4任课教师冯红考试成绩四川大学生命科学学院制Western blot摘要:本文主要是针对Western blot的原理及操作进行了简单的阐述Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来然后再利用电场力的作
印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法1975年Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法称为Southern印迹法而后人们用类似的方法对RNA和蛋白质进行印迹分析对RNA的印迹分析称为Northern印迹法对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法对双向电泳
Western blot 实验技术原理Western Blot采用的是 HYPERLINK t _blank 聚丙烯酰胺凝胶电泳被检测物是蛋白质探针是抗体显色用标记的二抗经过PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上固相载体以非共价键形式吸附蛋白质且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原与对应的抗体起免疫反应再与酶荧光或同位素
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质的检测与分析 ——Western bolt2008.61.原理转膜SDS-PAGEWestern Blot 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳区分不同的蛋白组分并转移至固相支持物 (例如NC膜等)上通过特异性抗体作为探针标记的二抗显色对靶蛋白含量进行检测2.材料2.1 仪器垂直板电泳槽电泳仪转移电泳槽(湿转)水平摇床冷冻离心机分光光
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 让我们把蛋白质看作具有独特而奇妙性质的实体Western blotting为什么要作蛋白质印迹实验研究一些体外的蛋白质分子寻找目的蛋白是否存在样品当中蛋白质的表达情况上调或下调表达在不同的样品中如疾病和正常的样品之间的表达差异性定义:印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上而后利用相应的探
实验十八、Westernblot印迹分析技术一、概述WesternBlot是指利用SDS-电泳,将各种蛋白质分离开后,通过电泳转移印迹到固相硝酸纤维素膜上,然后利用特异性抗体进行酶联免疫反应(ELISA),它具有特异性高,灵敏度好等优点。Western Blot所用的酶主要为碱性磷酸酶(AP)和辣根过氧化物酶(HRP)。用前者标记的第二抗体可检测出10-15pg的抗原;用HRP标记的第二抗体可检测
Western blot 实验常见的问题指南根据问题的类型主要分成以下几类(以下权作参考请勿盲目模仿):1.?参考书推荐A.?对初学者看什么比较好解答:《抗体技术实验指南》和Antibodies(a laboratory manual wrote by Ed Harlow david lane)两本书不错2.?针对样品的常见问题B.?做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot
(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时要注意其优点和缺点:优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态 可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点: 染料影响蛋白质移动速度分子量测定略欠精确影响蛋白质与膜的结合力.购买信息:中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)V5235S200μg国产80元分子量大小:(14.
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Westernblot 实验步骤?1. 组织块称重?2. 利用液氮研钵粉碎组织块?3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA)PMSF(每克组织30μl10 mgml PMSF)利用Polytron进一步匀浆(15000转分1分钟)维持4℃?4. 加入PMSF(每克组织30μl10 mgml PMSF)冰上孵育30分钟?5. 移入 =7typeid=88 t _blank 离心管4
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