基因突变检测实验操作流程一DNA提取 RNA(详见QIAGEN Rneasy FFPE Kit货号74404)注意:所有的离心步骤均在室温下进行用刀片切除多余石蜡暴露组织切片厚度为5-10um(若样本表面已暴露于空气中则弃掉刚开始的2-3片)迅速将样本切片放入或的小离心管中加入1ml的二甲苯盖上管盖旋涡样剧烈振荡10s室温下全速(14000rpm)离心2min弃掉上清夜不要接触到沉淀加入1ml乙醇
CTAB法提取DNA加700ulCTAB+20ul DTT,水浴65℃,15min,摇一次/5min4℃离心15min。取出离心管,每管加入等体积的酚氯仿,轻轻混匀(管内液体分三层),12000rpm,15min,4℃。将上清液一入另一离心管中,加入等体积预冷的异丙醇,轻轻混匀,在-20℃放置15~20min,静置到DNA析出,12000rpm,5min,DNA附着于离心管壁上。用70%的乙醇
采用CTAB法提取植物基因组DNA并对CTAB法作了一些改进具体步骤如下:(1)将处理好的叶片至于离心管中用液氮研磨成粉末加入1ml预处理液并混匀?6000rmin离心5min后弃上清液(2)重复步骤(1)3次(3)向离心管中加入650μl?65℃预热的CTAB提取液混匀65℃水浴40min期间不时晃动(4)水浴结束后10000rmin离心6min将上清液(650μl)移入新的离心管中加入2
CTAB法提取DNA1.研磨 取2—4cm的叶片放入研钵加入CTAB溶液800μl进行研磨然后将研磨的液体转入ml的离心管中2.样品水浴56—65℃30min期间颠倒混匀数次3.在通风橱中加入氯仿800μl混匀置于离心机13000rmin离心5min4.吸取上清400μl左右转入一新的离心管中加入95无水乙醇800μl轻轻颠倒混匀5.置于离心机13000rmin离心5min去掉上清6.加75酒精静
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级2013512??组织石蜡包埋和切片技术在制作切片或超薄切片时由于组织是柔软的或局部的软硬不均这样制作厚薄均匀的切片是困难的所以有必要用一定物质浸透组织内部整个组织一样硬化以利于切成薄片这种物质叫做包埋剂一股用光学显微镜观察的切片用石蜡火棉胶炭蜡明胶等作包埋剂电子显微镜则用环氧树脂聚苯乙烯树脂异丁烯树脂及水溶性树脂 程序(一)
CTAB法提取植物基因组DNA 这种方法是由Murray 和Thompson(1980)修改而成的简便方法CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂可溶解细胞膜它能与核酸形成复合物在高盐溶液中(( molL NaCl)是可溶的当降低溶液盐浓度到一定程度( molL NaCl)时从溶液中沉淀通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白多糖类物质分开最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA而CTAB溶于乙醇或异
中量提取质粒DNA准备以下灭菌的材料: ml EP 管烧瓶50 ml 离心管P1P2P3 溶液异丙醇5 M 盐酸胍1×TE(pH )E HYPERLINK lution盛有50 ml LB 培养液的容量为200 ml 的烧瓶从培养好的平板上挑取单克隆接种到盛有50 ml LB 培养液的烧瓶中置于37 ℃摇床(180 rpm)培养12-18 h将培养好的菌液到入灭菌的50 ml 离心管
石蜡包埋切片操作程序 石蜡包埋切片操作程序(植物)1 将材料加入卡若斯固定液中固定24h;2 用针管抽掉卡若斯固定液,立即加入苏木精染色液染色48h(具体时间依材料而定);3 用针管抽掉染色液,并用蒸馏水洗涤7-8次,刚开始1小时一次,以后时间间隔逐渐拉长,晚上置于蒸馏水中过夜;4 用针管抽掉蒸馏水,依序用30%、50%、70%、80%、90%乙醇脱水各一次,每次间隔20分钟;5 100%乙醇脱
石蜡包埋机(paraffin embedding station)Leica EG1150H操作方法打开电源开关,按ON/OFF键后,石蜡包埋机开始进入工作状态。其中,机器各部分温度均设为60℃。待蜡箱中的石蜡融化后,开始包埋。取出预热好的石蜡包埋框,使蜡箱中的熔蜡流入其中,用加热的镊子将浸蜡后的组织块置于包埋框中,正确定位后,盖好包埋框盖子。这些工作均在包埋框内石蜡未凝结前完成。然后加满熔蜡
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级从动物肝组织中分离提取纯化和鉴定一种酶10级七年二班第五组材料的选择因动物肝脏中的酶往往结合较多的脂质核酸的物质所以取饥饿24小时的动物肝脏为实验材料材料的预处理细胞破碎 机械破碎法:可选用捣碎法或匀浆法 使用匀浆法时应先将大块的组织或者细胞团用组织捣碎机或研磨器械捣碎分散 研磨法常用于微生物和植物组织细胞的破碎故本实验
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