SDS-PAGE测定蛋白质分子量的基本原理和主要步骤原理SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基磺酸钠) SDS能断裂分子内和分子间氢键破坏蛋白质的二级和三级结构强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中与SDS分子按比例结合形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物这种复合物由于结合大量的SDS使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有
实验七 SDS-电泳法测定 蛋白质分子量 实验目的学习并掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法和测定蛋白质分子量的技术实验原理1、蛋白质混合样品中各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带电荷多少等因素所造成的电泳迁移率有差别。在聚丙烯酰胺凝胶系统中,加入一定量十二烷基硫酸钠(SDS),形成蛋白质-SDS复合物,这种复合物由于结合了大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态,形成了仅保持原有分子大小为特征
有篇Nature的protocal我们试验室的Tricine-SDS-PAGE就是参照其做的 Tricine sds page.pdf (209.29k) Tricine-sds-page 一.试剂及缓冲液AB-3 浓缩胶 : 9.6g丙烯酰胺 0.3g甲叉双丙烯酰胺 溶于20ml水.(49.5T3Cmixture)AB-6 分离胶 : 9.3g丙烯酰胺 0.6g甲叉双丙烯酰胺 溶于20ml
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术首先在1967年由Shapiro建立1969年由Weber和Osborn进一步完善一原理????? 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 (简称Acr) 和交联剂NN—亚甲基双丙烯酰胺(简称Bis)在催化剂过硫酸铵(AP)NNNN-四甲基乙二胺(TEMED)作用下聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶并以此为支持物进行电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分
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电泳过程中分子迁移的规律小分子走在前头大分子滞后电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒夹在两块玻璃板之间的凝胶【实验试剂】(ml) 50(ul)体积 5(ul)六样品的准备 在低分子量标准蛋白质和待测样品中分别加入适量还原缓冲液放入沸水浴中加热35min取出冷至室温
3. 当蛋白质的分子量在15000200000之间时电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系符合下列方程: 1gMr =K―bmR 式中:Mr为蛋白质的分子量K为常数b为斜率mR为相对迁移率在条件一定时b和K均为常数 若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图可获得一条标准曲线未知蛋白质在相同条件下进行电泳
胶原蛋白-是细胞外基质的主要成分,相对分子质量约为300 000,是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的25%-30%胶原蛋白-是细胞外基质的主要成分,相对分子质量约为300 000,是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白,占蛋白质总量的25%-30%。学术术语来源---胶原蛋白海绵的生物特性及体内降解吸收文章亮点:1 胶原蛋白海绵是由胶原溶液经冻干形成,是基于胶原生
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化比较及特性鉴定的一种经济快速而且可重复的方法该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的SDS是一种去垢剂可与蛋白质的疏水部分相结合破坏其折叠结构并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后电荷因素可被忽略蛋白亚基的迁移率
1. 电泳: 指带电粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象 电泳按凝胶形状分: 水平平板电泳圆盘柱状电泳垂直平板电泳电泳按支持物分: 纸电泳醋酸纤维薄膜电泳淀粉凝胶电泳琼脂凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳返回
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