又称体外DNA扩增技术是指利用耐热DNA聚合酶的反复作用通过变性-退火-延伸循环操作在体外特异地扩增所需要的DNA片段的一种技术它能快速将皮克(pg)水平的DNA特异地扩增100万倍左右达到微克(?g)水平优点:敏感度高特异性强产率高重复性好以及快速简便等扩增PCR的原理3端引物35?5?PCR的扩增效应越快越精确越昂贵 引物的序列及其与模板结合的特异性是决 定PCR反应结果的关键 引物
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RNA的聚合酶链式反应:目前常用的RNA检测方法有原位杂交点杂交Northern印记杂交以及核酸酶保护试验等这些方法的普遍缺点是难以检测低丰度的信使RNA并且操作繁琐将RNA反转录和PCR结合起来建立RNA聚合酶链式反应(RT-PCR)则可以克服上述缺点RT-PCR先在反转录酶的作用下以信使RNA为模板合成cDNA再以CDNA为模板进行PCR反应此法快速简便并且灵敏度高此法可以检测单个细胞中
在PCR反体系中dNTP终浓度高于50mM会抑制Taq酶的活性使用低浓度dNTP可以减少在非靶位置启动和延伸时核苷酸错误掺入高浓度dNTPs易产生错误掺入而浓度太低势必降低反应物的产量PCR常用的浓度为50200μM不能低于1015μM四种dNTP的浓度应相同其中任何一种浓度偏高或偏低都会诱导聚合酶的错误掺入降低合成速度过早终止反应PCR缓冲液: 用于PCR的标准缓冲液为1050mM的Tri
第三节 聚合酶链反应(polymerase chain reactionPCR) PCR是模拟体内DNA复制条件应用DNA聚合酶反应特异性扩增某一DNA片段的技术体外程序化的DNA合成技术1PCR2原 理:1)合成待扩增区域两端已知序列与模板DNA互补的寡核苷酸特异性引物引物的序列决定扩增片段的长度2)反应体系:DNA模板dNTPTaq DNA聚合酶buffer3)反应程序: 变
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级DNA多聚酶链式反应扩增DNA片断课题21多聚酶链式反应的概念一 课题背景2多聚酶链式反应的应用: 的诊断 和DNA 等各方面遗传疾病刑侦破案古生物学基因克隆序列测定1DNA分子的组成成分和结构DNA 分子的基本组成单位是 .共
高分子科学简明教程(2)类型:聚合反应机理:自由基共聚合离子共聚合和配位共聚合(3)意义:理论研究:通过共聚反应研究可了解不同单体和链活性种的聚合活性大小有关单体结构与聚合活性之间的关系聚合反应机理多方面的信息等完善高分子化学理论体系 实际应用:开发聚合物新品种提高聚合物的综合性能通过共聚反应可吸取几种均聚物的长处改进多种性能如机械性能溶解性能抗腐蚀性能和老化性能等从而获得综合性能均衡优良的聚合物
聚合酶链式反应(PCR)聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
聚合酶链式反应(PCR)聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
新沂一中2010届第二学期高三生物一轮复习教学案017 选修一 多聚酶链式反应扩增DNA片段【学习目标】 1了解PCR技术的基本操作 2理解PCR的原理 3讨论PCR的应用【知识梳理】一PCR技术扩增DNA的过程与细胞内DNA复制过程类似:1.1细胞内DNA复制条件分析:条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打
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