对荧光定量PCR结果的分析方法我们分为两种:绝对定量分析法和相对定量分析法1绝对定量分析方法起始浓度的对数跟循环数的线性关系标准曲线由已知拷贝数的标准品绘制根据样品的Ct值可求样品的模板量(1)标准品的制备:1V的样品原液(i)9V稀释缓冲液得到ii1V的ii 9V稀释缓冲液得到iii1V的iii 9V稀释缓冲液得到iv1V的iv 9V稀释缓冲液得到v(2)拷贝数的计算:待测样本浓度(ngul)
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实时定量PCR技术 定量PCR阈值与C(t)值C(t) value 初始模板量对数---C(T)循环数标准曲线浓度的对数值与循环数呈线性关系根据样品扩增达到域值的循环数(Ct值)就可分析样品中起始模板量化学试剂有104熔链曲线分析Tm适用范围验证试验样品扩增:正常vs肿瘤Multiplex Reactions: C(t)GAPDH表达故障排查---软件界面精密度高
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级1890型PCR荧光分析仪 介绍及应用实时荧光定量PCR的应用 临床方面的应用 ? 疾病的临床早期诊断 ? 建立病原体病分子诊断标准 ? 疗效考评 ? 指导制订感染性疾病合理治疗方案 ? 了解感染性疾病病人用药后病情的变化情况 ? 医院血站及防疫站的确诊 ? 新药研究中药物的作用效果? 研究Elisa方法的漏检率 ? 病毒性疾
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第五章 分子荧光分析法荧光 自然界存在这样一类物质当吸收了外界能量后能发出不同波长和不同强度的光一旦外界能源消失则这种光也随之消失这种光称为荧光 外界提供能量的方式有多种如光照加热化学反应及生物代谢等通过光照激发产生的荧光称为光致荧光 根据激发光的波长不同荧光可分为X射线荧光紫外可见荧光和
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第三章 荧光分光光度法(Fluorescence Spectrophotometry)(5)荧光的熄灭 荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光熄灭 这些引起荧光强度降低的物质称为熄灭剂 导致荧光熄灭作用
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级2012216??单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级2012216??单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级2012216??LM 2012实时荧光PCR仪 基 本 构 成 仪器外观状态指示灯风扇出风口36孔样品盘RS
实时荧光定量PCR (RT-PCR)关键词:实时荧光定量PCR RT-PCR原理 荧光阈值 Ct值 标准曲线的绘制 荧光扩增曲线一 实时荧光定量PCR在PCR反应中无论是定性还是定量分析分析的都是PCR的终产物但是有时候想知道的却是未经PCR放大之前的起始模板量RT-PCR应用而生原理 图1 原理图 图2 Taqmen 探针如
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