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  1）准备感受态细胞（1）25ml YPD 接种GS115单菌落，250rpm，300C，摇菌16-18 hours；（2）25ml YPD，接种百分之五，同时留1ml空白YPD（真馏水也行），30度 ，250rpm振荡培养～5hours至 A 600为 0 8～1 0（大约108细胞/ml）；（3）1500rpm室温离心5min收获细胞，每份感受态需要(15ml酵母/15mlEP管)×4

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  一、酵母感受态细胞的制备1 在YPDA培养基上接种酵母AH109菌株，培养时间≤4周，菌落直径为2-3 mm，在15 mL离心管中加入3 mL新鲜的YPDA液体培养基，每个离心管中一个菌落，30 ℃，250 rpm，8 h。2 吸取10 μL 种子菌加入到含有50 mL YPDA的250 mL 三角瓶中，30 ℃，250 rpm，16-20 h。测OD600=015-03，将培养液移至50 m

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  目录来源螺旋网大肠杆菌感受态细胞的制备 2一、CaCl 感受态细胞的制备 32二、电转感受态细胞的制备 4枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化14农杆菌感受态细胞的制备及转化17酵母感受态细胞的制备及转化 18关于载体连接的讨论 23 -1- 大肠杆菌感受态细胞的制备体外连接的 DNA 重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。野生型 并不容易转化，这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA

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  大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节 概 述在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的 mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌，需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源 DNA。转化(Transformation)是将外源 DNA 分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的

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  农杆菌感受态细胞的制备［实验原理］在利用根癌农杆菌介导的基因转化中，首先要获得含有目的基因的农杆菌工程菌株。在基因工程操作中，感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。农杆菌的感受态可用CaCl2处理而诱导产生。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl2溶液中，0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变，此时的细胞呈现出感受态。制备

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  感受态细胞制备1 挑取一单克隆与5 ml LB培养基中，37℃，200rpm 过夜。2 取 2 ml 菌液于新鲜的200 ml LB中，置于37℃摇床至OD约为053 收集菌于4个50 ml离心管中，冰浴1h4 4℃离心515min，3500 rpm，去上清。（以后所有枪头、离心管都要冷浴）5 加20 ml 冷的Buffer 1 于每个50 ml离心管中，轻轻摇匀。6 冰浴15 min。7 轻

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