引物设计的原则引物设计的原则Primer Premier 简介Sequence name引物及产物信息引物编辑红色为信号肽 蓝色为BamHI酶切位点 下划线标出酶切位点的阅读框 Primer2: 5 CTTGTACAGCTCGTCCATGCCGAGA…….NR1序列:
使用Oligo 6和Primer Premier 等软件设计PCR引物张新宇(中国医科院肿瘤研究所北京100021)电子邮件: HYPERLINK mailto: 在当今分子生物学研究中PCR技术已成为使用最多最广泛的技术之一而引物设计是PCR技术中至关重要的一环在PCR扩增以前一般模板序列已被全部或部分确定要想扩增出理想的目的片断一般都得通过正确设计PCR引物也有的人不经过设计直
Click to edit Master title styleClick to edit Master text stylesSecond levelThird levelFourth levelFifth level6132012??实时PCR引物探针设计及软件使用厦门大学分子诊断教育部工程研究中心引物的重要性上游引物 聚合酶DNA模板dNTPs下游引物PCR反应的效率和特异性取决于两个
引物设计软件Oligo使用方法介绍荧光定量PCR仪荧光定量PCR基因扩增仪作为目前最好最专业的引物设计软件Oligo的功能很强在这里我们介绍它的一些主要功能如:普通引物对的搜索测序引物的设计杂交探针的设计以及评估引物对质量等等在正式进行引物设计前我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列根据不同的实验情况导入模板有三种方法:1直接用键盘输入:a点击file菜单中的New Sequ
PCR 引物设计Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性与适当引物杂交再用DNA聚合酶延伸扩增DNA的设想1983年Mullis发明了PCR技术使Khorana的设想得到实现1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶(Taq)引入了PCR技术1989年美国《Science》杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首比喻1989年为PCR爆炸年Mullis荣获1993年度诺贝尔化学奖 5? 5?
PCR引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段使其能有效地扩增模板DNA序列因此引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否 要设计引物首先要找到DNA序列的保守区同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构如这个区域单链能形成二级结构就要避开它如这一段不能形成二级结构那就可以在这一区域设计引物现在可以在这一保守区域里设计一对引物一般引物长度为1530碱基扩增片段长度为100600碱基对让我们
引物长度(primer length)产物长度(product length)序列Tm值 (melting temperature)ΔG值(internal stability)引物二聚体及发夹结构 (duplex formation and hairpin)错误引发位点(false priming site)引物及产物GC含量position) 反映了引物
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①引物长度:15-30bp,常用为20bp左右。 ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。 ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产
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