实验一 质粒DNA的微量制备(4学时)实验目的了解质粒的特性及其在分子生物学研究中的作用掌握碱裂解法分离纯化质粒DNA的方法 实验原理质粒(Plasmid)是一种双链的共价闭环状的DNA分子它是染色体外能够稳定遗传的因子质粒具有复制和控制机构能够在细胞质中独立自主的进行自身复制并使子代细胞保持它们恒定的拷贝数目前质粒已广泛的用作基因工程中目的基因地运载工具—载体从大肠杆菌中提取质粒
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验八质粒DNA的小量制备一般操作步骤:培养细菌使质粒扩增收集和裂解细菌分离质粒DNA碱变性法煮沸法去污剂法有机溶剂法一实验目的掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理熟悉碱裂解法提取质粒DNA的方法分离质粒DNA需要去除的:大肠杆菌染色体DNA蛋白质RNA二实验
SDS碱裂解法制备质粒DNA: 大量制备用碱和SDS处理可以从大规模(500ml)的细菌培养物中分离质粒DNA所获得的质粒则可通过柱层析或CsCl-溴化乙锭梯度离心进一步纯化:材料:缓冲液和溶液:碱裂解液I:50mmolL 葡萄糖25mmolL Tris-HCl ()10mmolL EDTA ()(溶液I一次可配制100ml在15psi[]压力下蒸汽灭菌15min保存于4摄氏度)碱裂解液II: N
质粒DNA的提取和纯化 郑敏生化与分子生物学系分子生物学从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递,基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能,以及细胞信号的转导等。 基因工程移液器和EP管质 粒质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,独立于染色体之外的、能自主复制的双链环状脱氧核糖核酸物质。质粒
生物化学实验报告姓 名: 学 号: 专业年级: 组 别: 生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称质粒DNA的提取定量与酶切鉴定实验日期 FORMTEXT 2014-12-11实验地点 FORMTEXT 第4实验室合指导老师评分教师签名
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实 验 七 质粒DNA的提取和鉴定 目的 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA能从细菌中提出来又能再转入细菌这个过程称转化转入的质粒DNA仍能进行复制产生多个拷贝提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法煮沸裂解羟基磷灰石柱层析法质粒DNA释放法酸酚法等
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