一猪胰蛋白酶制备(一)猪胰蛋白酶原的提取猪胰脏(新鲜的或杀后立即冷藏的)除去脂肪和结缔组织后绞碎 加入2倍体积预冷的乙酸酸化水()于1015℃搅拌提取24小时四层纱 布过滤得乳白色滤液用 H2SO4调pH至放置34小时后用折迭 t _blank 滤纸过滤得黄色透明滤液(约升)加入固体硫酸铵(予先研细)使溶液达饱和度(每升滤液加492克)放置过 夜后抽滤(挤压干)得猪胰蛋白酶原粗制品(二)胰
药用胰蛋白酶的制备实验目的掌握制备胰蛋白酶的原理掌握离子交换法提取生化药物的步骤实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中在Ca2的存在下被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活从肽链N端 赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开失去一段六肽分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶胰蛋白酶原的分子量约为24000其等电点约为胰蛋白酶的分子量与其酶原接近(23300)其等电点约为最适在pH=
CCChymotrypsin Catalytic Mechanism A2NNCC[NH2]OO[NH2]
实验十 猪胰蛋白酶的纯化及其活性测定一、实验目的1 学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法。2 学习用紫外法测定酶活性,搞清酶活性与比活性的概念。二、实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中,在Ca2+的存在下,被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活,从肽链N端 赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开,失去一段六肽,分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶。胰蛋白酶原的分子量约为24000,
胰蛋白酶活性测定在动物胰脏中胰蛋白酶是以无活性的酶原状态存在的在生理条件下胰蛋白酶原随胰液分泌至十二指肠后在小肠上腔有Ca2的环境中为肠激酶或胰蛋白酶所激活其肽链?N?-端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解失去一个酸性6肽其分子构象发生一定的改变后转变为具有催化蛋白质水解活性的胰蛋白酶胰蛋白酶原分子量约为24?000其等电点为pH8.9胰蛋白酶的分子量约为23?400其等电点为pH?10
胰蛋白酶的配制过滤除菌与分装(1ml) 准备样品:Try干粉PBS缓冲液离心管两个冻存管20个盒子一个枪头1盒灭菌器注射器准备工作:将离心管冻存管装载盒子中高温高压灭菌配制:1.称取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液浓度为用电子天平准确称取粉剂50mg溶入离心管PBS(PH到左右)液中搅拌混匀置于4℃内过 夜
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蛋白酶的制备及活力的测定 目的要求1.学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法2.了解酶的活性与比活性的概念实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中在Ca2的存在下被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开失去一段六肽分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶胰蛋白酶原的分子量约为24000其等电点约为胰蛋白酶的分子量与其酶原接近(23300)其等电点
大豆乳清蛋白胰蛋白酶改性工艺研究2 水解时间对水解程度的影响
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