编号:2-9主题:digital PCR概述:Digital PCR(dPCR)即数字PCR,它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR,数字PCR可以直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。数字PCR是最新的定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量,是一种绝对定量的方法。由于数字PCR能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量,因此特别适用于依靠Real-tim
编号:2-1主题:RT-PCR概述:RT- PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)即逆转录PCR,是将RNA的逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应(PCR)相结合的技术。RT-PCR技术灵敏而且用途广泛,可用于检测细胞/组织中基因表达水平,细胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列等。目的:检测目的基因的转录产
编号:2-5主题:Real-Time PCR概述:Real-Time PCR 技术,又称实时定量荧光PCR(real-time quantitative PCR),是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。实时荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems推出,该
编号:2-5主题:RACE技术概述:近年来随着生物技术的不断发展,出现了许多克隆新基因的方法和手段,cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。目的:1可用于cDNA文库的构建及筛选。2应用RACE克隆已知片段的旁
编号:2-3主题:基因芯片 概述:基因芯片(又称 DNA 芯片、生物芯片)技术系指将大量(通常每平方厘米点阵密度高于 400 )探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交,通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。通俗地说,就是通过微加工技术 ,将数以万计、乃至百万计的特定序列的DNA片段(基因探针),有规律地排列固定于2cm2 的硅片、玻片 等支持物上,构成的一
编号:2-6主题:DNase I足迹试验概述:DNase I足迹法于1978年引入科研领域,其原理与DNA的化学测序法相似,首先将待测双链DNA片段中一条链的一端选择性地进行标记,然后加入适当浓度的DNaseI,使在DNA链上形成缺口,经过变性后电泳分离,放射自显影,即形成以相差一个核苷酸为梯度的DNA条带。但当DNA片段与相应的序列特异性DNA结合蛋白结合后,DNA结合蛋白可保护相应的DNA序
编号:2-2主题:第二代DNA测序技术概述:第一代测序(缺点:通量低1000个核苷酸/反应,费用高)?化学降解法?双脱氧链终止法(Sanger法)?荧光自动测序技术?杂交测序技术高通量测序:第二代测序(next-generation sequencing,NGS)第二代测序技术的核心思想是边合成边测序(Sequencing by Synthesis),即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序
编号:1-9主题:荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)概述:荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)作为一种高效的光学“分子尺”,在生物大分子相互作用、免疫分析、核酸检测等方面有广泛的应用。在分子生物学领域,该技术可用于研究活细胞生理条件下蛋白质-蛋白质间的相互
编号:2-7主题:DNase I超敏感位点的定位研究概述:早在20世纪80年代初期,研究人员发现染色质对脱氧核糖核酸酶I(DNase I)的敏感性与基因的转录有关,即当一个基因处于转录活性状态时,含有这个基因的染色质区域对DNase I降解的敏感性要比无转录活性区域高出100倍以上,被称为DNase I超敏感位点(DNase I hypersensitive site,DHS)。经过进一步研究发
核苷酸1核酸酶的定义及分类核酸酶是指所有可以水解核酸的酶依据底物不同分类DNA酶(deoxyribonuclease DNase):专一降解DNARNA酶 (ribonuclease RNase):专一降解RNA依据切割部位不同核酸内切酶:分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶核酸外切酶:5′→3′或3′→5′核酸外切酶核酸的合成从头合成途径(de novo synthesis pathw
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