PCR (PolymeraseCh皿Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下, 以母链DNA 为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。 可用千基因分离克隆,序列分析,基因表达调控,基因多态性研究等许多方面。PCR技术的基本原理1模板DNA;2
一般为48h以内有些最好于当日电泳检测大于48h后带型不规则甚致消失 :Mg2离子浓度对PCR扩增效率影响很大浓度过高可降低PCR扩增的特 异性浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带 PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致或大或小或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带非特异性条带的出现其原因:一是引物与靶序列不完全互补 或引物聚合形成二聚体二是Mg2离子浓度过
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原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用在科学研究中,每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世,从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域,50年代电子显微镜引入形态学观察领域,带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究;60-70年代,免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用,又将观察的水平由亚细胞结构推向了蛋白质分子水平,使细胞内众多的活性物质得以进行细胞或亚细胞水平的定位,对医学生物学
RT-PCR原理与实验技术一知识背景:1基因表达:DNA RNA Protein单拷贝基因表达存在逐步放大机制如一个蚕丝心蛋白基因 104个丝心蛋白mRNA(每个mRNA存活4d可以合成105个丝心蛋白) 共合成109个丝心蛋白 因此单拷贝基因的mRNA表达水平对于其功能水平的调控是非常重要的 2PCR技术(Polymerase
PCR技术的基本原理:该技术是在模板DNA引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应DNA聚合酶以单链DNA为模板借助一小段双链DNA来启动合成通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合形成部分双链在适宜的温度和环境下DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端并以此为起始点沿模板5′→3′方向延伸合成一条新的DNA互补链PCR目录 〔PCR原
原位PCR技术基本原理、类型、步骤和应用在科学研究中,每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世,从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域,50年代电子显微镜引入形态学观察领域,带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究;60-70年代,免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用,又将观察的水平由亚细胞结构推向了蛋白质分子水平,使细胞内众多的活性物质得以进行细胞或亚细胞水平的定位,对医学生物学
核酸体外扩增最早的设想1983年春天的一个周五晚上 Mullis开车带着女友前往乡间的小屋度周末在蜿蜒的乡间公路上开着车一段DNA反复复制的景像在他的脑海里冒了出来 Cycle 1 2分子72℃1min长度至少16bp通常20-30bpTm=[J](GC)-(600N) N:链长 J:单价离子浓度 若N=20 GC=55 [J]=60mmolL则: Tm
第 11 期 (总第 262 期)
PCR突变技术方法概览1基于PCR 的体外诱变技术 定点突变的方法很多而基于 PCR 的定点突变技术由于其突变效率高操作简单耗时短成本低廉等优点而倍受瞩目近十年来基于 PCR 的定点突变技术获得了长足的发展目前运用此技术已能实现各种类型的基因突变 基因突变实验包括以下几个步骤:1目的基因全序列变异文库的构建2利用高通量表达筛选载体从变异文库中筛选表达突变体3表达突变体的鉴定和表达
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