在精编分子生物学实验指南上有一部分讲到了酿酒酵母,电转化具体过程如下:1)将转化用酵母菌株的单菌落接种于5ml YPD培养基中,30度过夜培养至饱和。2)转化前一天晚上,在装有500ml YPD培养基的2L无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液,于30度剧烈振摇,直到细胞密度达1*10的8次方(OD600约为13-15)。3)于4度4000g离心收获培养细胞,细胞用80ml无菌水重悬。为了增加细
Transformation of Pichia pastoris GS115毕赤酵母电转化方法电穿孔法简便快速高效是理想的转化方法线性化质粒DNA对Pichia pastoris GS115的转化一 菌体的准备:(1)挑取酵母单菌落接种至含有5ml YPD培养基的50ml三角瓶中30℃250300rmin培养过夜YPD培养基配方:注意高温灭菌的温度1 L培养基:900 mL水中加入10 g Ye
酵母转化原理:我们采用的是PEG LiAc法转化酵母PEG是一种高分子聚合物只有分子量达到3000 左右的PEG才会发挥最大的转化促进作用本文使用的PEG分子量为3350 实验结果表明促转化效果可以达到103105 cfuμg PEG在酵母转化中起到在高浓度醋酸锂环境中保护细胞膜减少醋酸锂对细胞膜结构的过渡损伤同时促进质粒与细胞膜接触更紧密PEG的浓度是务必适宜这一点很重要LiAc可使酵母细胞产生
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1)准备感受态细胞(1)25ml YPD 接种GS115单菌落,250rpm,300C,摇菌16-18 hours;(2)25ml YPD,接种百分之五,同时留1ml空白YPD(真馏水也行),30度 ,250rpm振荡培养~5hours至 A 600为 0 8~1 0(大约108细胞/ml);(3)1500rpm室温离心5min收获细胞,每份感受态需要(15ml酵母/15mlEP管)×4
电转酿酒酵母实验步骤(以含有单杂载体pAbAi整合后的Y1H菌株为例)1)将转化用酵母菌株的单菌落接种于100mlSD/-Ura培养基中,30℃过夜培养至OD600=13,时间大概23h;3)酵母菌液置于冰上10min,然后于4℃4000g(1500r/min)离心收获培养细胞,将两管细胞置于一管,加入50ml冰冷的灭菌水重悬洗涤,重复两次。6)在离心后的酵母细胞中加入10ml冰冷的1mol/
中国海洋药物杂志2010 年
一、酵母感受态细胞的制备1 在YPDA培养基上接种酵母AH109菌株,培养时间≤4周,菌落直径为2-3 mm,在15 mL离心管中加入3 mL新鲜的YPDA液体培养基,每个离心管中一个菌落,30 ℃,250 rpm,8 h。2 吸取10 μL 种子菌加入到含有50 mL YPDA的250 mL 三角瓶中,30 ℃,250 rpm,16-20 h。测OD600=015-03,将培养液移至50 m
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