菌物研究2003 , 1 (1)
聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段一实验目的1.学习PCR基因扩增的基本原理和操作方法2.理解PCR基因扩增在分子生物实验技术中的重要性3.了解引物设计的一般要求二实验原理多聚酶链式反应(Polymerase Chain Reaction PCR ):原理类似于DNA的变性和复制过程即在高温(93-95℃)下待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板而后在低温(3765℃)情况下
第 13 卷 第 1 期
聚合酶链式反应(PCR)及酶切鉴定转化产物 一、实验目的二、实验原理三、实验试剂四、实验步骤五、注意事项讲授内容学习和掌握PCR的基本原理和实验技术学习和掌握限制性内切酶双酶切鉴定转化产物的基本原理和实验技术掌握琼脂糖凝胶电泳的基本原理和实验技术一、实验目的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种通过体外酶促反应大量、快速、选择性地合成目的DNA片段的核
《铝加工 》
扩增已知序列旁邻的未知DNA序列的高效TAIL-PCR方法(hiTAIL-PCR)扩增已知序列旁邻的未知DNA序列的高效TAIL-PCR方法High-efficient thermal asymmetric interlaced PCR (hiTAIL-PCR)Want to mining unknown sequences quicklyJust hi-TAIL it!?引子: 扩增已知序列
6将上清液转移到一个新离心管中加 mL 异丙醇 充分混匀 12000 g 离心 5 min (4 ℃ )7去掉上清加入 mL 70 乙醇颠倒离心管数次 12000 g 离心 1 min(4℃)8去掉上清空气中干燥 DNA沉淀 15 min9将DNA沉淀溶解于 100 μL TE 或水中10浓度和纯度测定: OD260OD280= 1 OD260= 50 μg mL
PCR 扩增不出或扩增效率低的解决方法对PCR退火温度进行梯度设置(例:55℃±10℃)根据TM值来选择最适温度确认模板是否存在降解问题适当调整模板引物聚合酶的量反应体系里补加甜菜碱(终浓度为1M)DMSO(总体积的1-5注:加过多会影响酶的活性)如果模板是菌液未扩增出的可选用所提的质粒再做PCR扩增 更换其他DNA聚合酶做小试实验(PfuFastpfuKOD)目前首选聚合酶为Pfu在扩增不出
《黑龙江畜牧兽医》科技版
PCR(Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤:(1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链(2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下以目的DNA为模板
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