1)准备感受态细胞(1)25ml YPD 接种GS115单菌落,250rpm,300C,摇菌16-18 hours;(2)25ml YPD,接种百分之五,同时留1ml空白YPD(真馏水也行),30度 ,250rpm振荡培养~5hours至 A 600为 0 8~1 0(大约108细胞/ml);(3)1500rpm室温离心5min收获细胞,每份感受态需要(15ml酵母/15mlEP管)×4
一、酵母感受态细胞的制备1 在YPDA培养基上接种酵母AH109菌株,培养时间≤4周,菌落直径为2-3 mm,在15 mL离心管中加入3 mL新鲜的YPDA液体培养基,每个离心管中一个菌落,30 ℃,250 rpm,8 h。2 吸取10 μL 种子菌加入到含有50 mL YPDA的250 mL 三角瓶中,30 ℃,250 rpm,16-20 h。测OD600=015-03,将培养液移至50 m
毕氏酵母(Pichia pastoris)感受态细胞制备及转化1、毕氏酵母氯化锂转化法(1)试剂1M LiCl(用去离子 \t _blank 蒸馏水配制,滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释)50% PEG3350(Sigma P3640? 用去离子 \t _blank 蒸馏水配制,滤膜过滤除菌,用较紧的盖子的瓶子分装)2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10m
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节 概 述在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的 mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源 DNA。转化(Transformation)是将外源 DNA 分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的
目录来源螺旋网大肠杆菌感受态细胞的制备 2一、CaCl 感受态细胞的制备 32二、电转感受态细胞的制备 4枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备及转化14农杆菌感受态细胞的制备及转化17酵母感受态细胞的制备及转化 18关于载体连接的讨论 23 -1- 大肠杆菌感受态细胞的制备体外连接的 DNA 重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。野生型 并不容易转化,这是由于细菌产生一种酶能迅速降解进入的外源DNA
感受态细胞制备和细菌的转化大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备从冻存管中挑取细胞在LB培养基平皿上划线接种后过夜培养挑取单克隆菌落至5 ml LB培养基中37℃220 rmin振荡培养过夜把菌液按1:100(视浓度而定)转接入50 ml LB液体培养基内37℃ 200 rmin培养至OD600≈ (大约3小时)此时菌液呈现半透明云雾状把菌液冰浴冷却10-15 min于4 ℃4000 rmin离心10
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转化方法:电击法 CaCl2 RuCl等化学试剂法感受态细胞:的处理后细胞膜的通透性发生变化成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态转化细胞(转化子):带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant ) 含Amp培养基超净工作台恒温培养箱实验步骤
大肠杆菌电转化感受态细胞制备及转化方法(Jin Quan-Wen Lab at XMU)一大肠杆菌电转化感受态细胞制备:第一天:1. 用枪头或接种环挑取单 =TitleClassID=keyword=克隆 克隆菌落接种入盛有5ml LB液体培养基的 =7typeid=88 t _blank 培养管中可以准备两管37?C220rpm培养过夜(14-16个小时)2. 高温灭菌大的离心瓶(2
细菌感受态的制备和质粒的转化实验目的 通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA转化的最基本操作以及如何提高转化效率的思路本实验综合因素较多难度较大是分子生物学中的一个很关键的实验手段实验原理 转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA而导致其原来的遗传性状发生改变这种遗传性状包括遗传型和表型的改变 感受态是受体菌能接受外源DNA能力的一种生理状态用CaCl2处理细菌改变细胞膜的
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