Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤:n?????样品制备n??? ?电泳分离n??? ?蛋白的膜转移n??? ?免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂n??? 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, pH 74 ; NP-40: 1% ;Na-de
Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤:n?????样品制备n??? ?电泳分离n??? ?蛋白的膜转移n??? ?免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂n??? 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, pH 74 ; NP-40: 1% ;Na-deo
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免疫印迹(Western Blot)操作规程实验目的:免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上然后利用抗体进行检测对已知表达蛋白可用相应抗体作为一抗进行检测对新基因的表达产物可通过融合部分的抗体检测实验原理:与Southern或Northern杂交方法类似但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶 HYPERLINK :.51protocolsa
实验十八、Westernblot印迹分析技术一、概述WesternBlot是指利用SDS-电泳,将各种蛋白质分离开后,通过电泳转移印迹到固相硝酸纤维素膜上,然后利用特异性抗体进行酶联免疫反应(ELISA),它具有特异性高,灵敏度好等优点。Western Blot所用的酶主要为碱性磷酸酶(AP)和辣根过氧化物酶(HRP)。用前者标记的第二抗体可检测出10-15pg的抗原;用HRP标记的第二抗体可检测
免疫细胞化学方法步骤 将已消毒的盖玻片置于6孔培养板中按2×104ml的细胞密度将细胞接种于培养板中进行细胞爬片培养6小时待细胞贴壁后加用培养液稀释的DADS液使终浓度30mg·L-1阴性对照组则为常规培养液3天后进行免疫细胞组织化学染色鉴定PBS清洗时将玻片置于小培养皿中步骤如下:1 PBS清洗标本 3次 各 1 min2 95酒精固定 15 min3 空气干燥 5min4 PBS清洗标本
免 疫 印 迹免疫印迹又常称Western blot是一综合性的免疫学检测技术它利用SDS-PAGE技术将生物样品中的蛋白质分子按分子量的大小在凝胶上分离开然后用电转移的方法将蛋白转移到固相膜上(NC尼龙或PVDF膜)最后进行免疫学检测由于免疫学检测敏感性高并且通过SDS-PAGE样品中的待检蛋白得到了浓缩因此Western blot的灵敏度特别高可达到放射免疫的分析水平而使用一般的免疫学检
细胞免疫荧光实验步骤细胞免疫荧光实验步骤 简单实验步骤如下:1.漂洗血清蛋白H7.2-7.4 37度 PBS 2小时.2.-20度甲醇固定20分钟后自然干燥 10分钟3.PBS洗净:3min34.1Triton:25min-30min.配成50ultriton5mlpBS5.PBS洗净:25min6.羊血清封闭:37度20分钟7.一抗4度过夜一般要大于18小时或者37度 1-2小时8.4度
CDR3LSensitivity 敏感性E(L)I(S)A (EngvallPerlmann van Weemen and Schuurs 1971)ELISA基本的实验过程 ?2007 American Association for Cancer Research 大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒 大小范围:μm - 300 μm 高
Westernblot 实验步骤?1. 组织块称重?2. 利用液氮研钵粉碎组织块?3. 加入RIPA缓冲液(每克组织3 ml RIPA)PMSF(每克组织30μl10 mgml PMSF)利用Polytron进一步匀浆(15000转分1分钟)维持4℃?4. 加入PMSF(每克组织30μl10 mgml PMSF)冰上孵育30分钟?5. 移入 =7typeid=88 t _blank 离心管4
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