3)克隆载体 ⅰ.复制子来源 i) 质粒DNA 质粒名称 大小(kb) 标记基因 拷贝数 来 源 pUB Kanr 50 金黄色葡萄球菌 pE194 Eryr
3. 分子杂交的一般程序 1) DNA和RNA的杂交 制备DNA或RNA样品→与固定基质结合→80℃真空固定→预杂交→加入标记探针杂交→洗涤→放射自显影或显色反应 2)蛋白质的免疫分析 制备蛋白质样品→与固定基质结合→常温空气中固定→封闭剂封闭→ 一抗反应→洗涤→二抗-酶偶联物反应→洗涤→显色反应(EIA) 或 → 一抗放射标记物→洗涤→放射自显
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第二章 基因工程的酶学基础Enzymes工具酶种类: Restriction endonucleaseDNA ligase DNA polymerase DNA prosessing enzyme一限制性核酸内切酶第一节 限制性核酸内切酶 一类能够识
利用双COS质粒载体构建基因组文库 2)同聚物加尾:可大大减少载体DNA自身连接 3) cDNA的定向插入5. 重组cDNA分子的转移和文库的建立 选用载体为质粒可直接转化若为λ载体则需进行体外包装感染等四. ?建立cDNA文库的特殊方法 1. Okayama–Berg法 1)T引物的合成:在质粒上进行用于合成第一条cDNA链 2)G引物
第七章 基 因 表 达第一节基因的体外定向突变3. 低聚核苷酸定向缺失2. 低聚核苷酸定向突变第二节 基 因 置 换一.?? DNA序列的查询收集整理和分析 1.已测定的基因序列:按基因的种类查询或物种种类查询 2.基因序列的登录 3.同源性分析二.?已发表论文查询三.?方法学查询
控制胰岛素合成的基因操作水平:一基因工程的概念受体细胞(2)举例:环状双链DNA分子三基因工程操作的基本步骤环境污染治理(2)转基因生物和转基因食品安全应该大范围推广1目的基因的获取2目的基因与运载体结合3将目的基因导入受体细胞4目的基因的检测与鉴定转录能力提升
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤:目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定基因的结构(补充知识)非编码区非编码区编码区与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点并与其结合②转录开始后RNA聚合酶沿DNA分子移动并以DNA分子的一条链为模板合成R
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级武汉科技大学制药过程与工艺第3章 基因工程制药工艺1本章内容3.1 基因工程概述3.2 基因工程制药微生物表达系统3.3 基因工程大肠杆菌的构建技术3.4 基因工程菌的发酵培养与控制3.5 重组人干扰素生产工艺2概述 20世纪70年代基因工程诞生最先应用在医药科学领域1982年第一个基因工程产品--人胰岛素在
第三章 基因工程的载体按载体性质分转基因植物体系第一节 质粒载体102023412λ噬菌体为线性双链DNA的细菌病毒具有互补的12bp粘性末端感染细菌后粘端互补成双链环状全长48531bp含50多个基因四λ载体的克隆原理和步骤1通过裂解过程增殖λ载体2载体与外源DNA的酶切载体一般要纯化左路右臂并进行去磷酸化处理3外源DNA与载体的连接形成的是多联体4重组噬菌体的体外包装需要单独制备衣壳蛋白包
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