实验十八、Westernblot印迹分析技术一、概述WesternBlot是指利用SDS-电泳,将各种蛋白质分离开后,通过电泳转移印迹到固相硝酸纤维素膜上,然后利用特异性抗体进行酶联免疫反应(ELISA),它具有特异性高,灵敏度好等优点。Western Blot所用的酶主要为碱性磷酸酶(AP)和辣根过氧化物酶(HRP)。用前者标记的第二抗体可检测出10-15pg的抗原;用HRP标记的第二抗体可检测
Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤:n?????样品制备n??? ?电泳分离n??? ?蛋白的膜转移n??? ?免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂n??? 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, pH 74 ; NP-40: 1% ;Na-deo
Western Blot中文一般称为蛋白质印迹它是分子生物学生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息 HYPERLINK :baike.baiduimage8474fbddadafbafc77c63876 o 查看图片
Western Blot(免疫印迹法)实验方法步骤Western Blot(免疫印迹法)主要包括以下4个基本步骤:n?????样品制备n??? ?电泳分离n??? ?蛋白的膜转移n??? ?免疫杂交与显色――蛋白检测溶液和试剂n??? 1X 磷酸盐缓冲液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, pH 74 ; NP-40: 1% ;Na-de
免疫印迹(Western Blot)操作规程实验目的:免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上然后利用抗体进行检测对已知表达蛋白可用相应抗体作为一抗进行检测对新基因的表达产物可通过融合部分的抗体检测实验原理:与Southern或Northern杂交方法类似但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶 HYPERLINK :.51protocolsa
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单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质的检测与分析 ——Western bolt2008.61.原理转膜SDS-PAGEWestern Blot 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳区分不同的蛋白组分并转移至固相支持物 (例如NC膜等)上通过特异性抗体作为探针标记的二抗显色对靶蛋白含量进行检测2.材料2.1 仪器垂直板电泳槽电泳仪转移电泳槽(湿转)水平摇床冷冻离心机分光光
四 川 大 学硕士研究生课程考试试卷名姓陈斌所在院(系所)生命科学院专 业细胞生物学S101671考试课程基因工程原理课程号考试方法试题综述学分4任课教师冯红考试成绩四川大学生命科学学院制Western blot摘要:本文主要是针对Western blot的原理及操作进行了简单的阐述Western印迹法是利用抗原抗体的免疫反应先将蛋白通过SDS-PAGE电泳分离开来然后再利用电场力的作
印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法1975年Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法称为Southern印迹法而后人们用类似的方法对RNA和蛋白质进行印迹分析对RNA的印迹分析称为Northern印迹法对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法对双向电泳
(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时要注意其优点和缺点:优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态 可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点: 染料影响蛋白质移动速度分子量测定略欠精确影响蛋白质与膜的结合力.购买信息:中范围蛋白质分子量标准(14.3-97.4KD)V5235S200μg国产80元分子量大小:(14.
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