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蛋白相互作用与酵母双杂交Protein-protein Interaction&Yeast Two-hybrid黄宝玉 2012817Slide 1报告内容:蛋白相互作用与研究方法酵母双杂交原理和方法酵母双杂交的发展已有实验的进展存在问题与下一步计划Slide 2Protein-protein Interaction蛋白质之间相互作用以及通过相互作用而形成的蛋白复合物是细胞各种基本功能的主要完成者
遗传H
Conservation of replication timing reveals global and local regulation of replication origin activityHYPERLINK =Mx000fcller CA[auth]Carolin A. Müllerand HYPERLINK =Nieduszynski CA[auth]Conrad
目录介绍4试剂盒物品清单 7额外附加物品列表9酵母菌株11酵母载体14方法简述:单杂交文库的构建和筛选16方法简述:双杂交文库的构建和筛选17构建用于酵母单杂交的报告质粒载体18构建用于酵母双杂交的DNA-BD融合载体19构建生成cDNA文库21构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库(简述)27酵母单杂交文库的构建和筛选28酵母双杂交文库的构建和筛选30方法A:通过酵母配对(Yeast Mat
酵母感受态细胞的制备及酵母转化酵母感受态细胞的制备转化规模YPDA 培养基平板上活化酵母菌小大文库接直径2-3ml的单克隆1个或多个于1ml YPDA 或SDa培养基中(最好选用四周之内的酵母菌落)涡旋打散菌体转移到表中右面所示体积的YPDA或SD培养基中50ml 50ml150ml30℃250rpm振荡培养16-18h至OD600大于1.5转移过夜培养的培养物于表中右面所示体积的YPDA中
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(酵母菌储存在-70℃中引物和质粒DNA储存在-20℃中)概念:1. 次序转化:指的是先将一种质粒转化进酵母中(常是DNA-BDbait plasmid)在选择培养基中选择出阳性克隆之后再将另外一个质粒(AD fusion library)转化进去优点:就是比共转化使用更少的质粒DNA也就是节约质粒DNA2. 共同转化:将两种质粒一起转化进酵母中优点:比次序转化更容易操作pGBKT7--
摘要 :?酵母双杂交系统对于研究蛋白与蛋白之间的相互作用虽然具有筛选量大、效率高及应用广泛等优点,但有它自身的缺陷。酵母培养的周期与大肠杆菌相比较长,酵母转化的过程较繁复,耗时较长,而且存在假阳性较多的问题,阳性克隆工作量太大,验证工作繁重。在此项目中酵母双杂交实验最关键的步骤是酵母培养时间的掌控。1构建CaM诱饵质粒① PCR 扩增CaM基因的开放阅读框,正向和反向引物分别加接酶切位点。②
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