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His-Tag 表达蛋白纯化原理方法和问题分析(转)组氨酸标签蛋白的纯化His-Tag融合蛋白是目前最常见的表达方式而且很成熟它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的活性无论是表达的蛋白是可溶性的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和色谱去(IMAC)纯化2.1 IMAC(Immobilized Metal-ion affinity chromatography)是Porath et 年用固定IDA作为
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中国组织工程研究第
复旦大学生物化学系黄伟达whuang@,2005年12月8日于华东理工大学 重组蛋白质的表达、复性与纯化为什么要重组基因表达? 1?蛋白质功能研究 2 生物制药和疫苗生产 3?疾病的基因治疗 4?食品、化工用酶制剂 5?抗虫、抗逆植物改良6 细胞代谢产物的富集基因表达体系及优劣势大肠杆菌表达体系蛋白质的复性工作中经常碰到的问题基因表达体系 1?原核体系2 真核体系 大肠杆菌 (Escherich
蛋白原核表达预实验:摸索最适的诱导浓度、诱导温度1 构建所需要的重组质粒,转化相应的表达菌株(如BL21,Rossetta),挑斑菌液PCR验证。2 分别挑取含有重组质粒和空载体的大肠杆菌Rossetta(或BL21)单菌落至5 mL 新鲜的2×YT液体培养基(含100 μg / mL Amp, 50 μg / mL Kan, 34 μg / mL Cm)中,37 ℃摇床,180 rpm 培养
第 30 卷 第1 期
重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量按Qiagen的操作手册进行,具体步骤如下。一、重组蛋白质的诱导表达1挑取转化有质粒的单菌落,接种于3ml 选择性LB液体培养基中,37?oC,250 rpm/min振摇培养过夜。2次日将培养过夜的菌液500 μl再接种于10 ml(1:20)选择性LB液体培养基中,37?oC,250 rpm/min振摇培养至光密度(OD600=06)时,取1 ml样本作
中国兽医学报
重组蛋白的大规模表达与纯化主要基于大肠杆菌(E. coli)表达系统1目标基因亚克隆利用KOD-PlusPfu等高保真酶通过PCR扩增含有酶切位点的目标基因连接到表达载体上(以PET系列载体为主)这些载体含有HisGST和Trx等助溶标签便于后续纯化同时这些载体上含有蛋白酶的酶切位点可按客户要求切除或保留标签2目标蛋白的表达与纯化将重组表达载体转化合适的大肠杆菌表达菌株中对时间温度以及IPTG浓度
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