亲和柱层析操作规程(可溶性蛋白)1.装柱: 取出层析柱用去离子水冲洗干净连接好管子后固定柱子用水冲洗层析柱3-5次每次10ml去离子水取出填料静止至室温后根据需要用移液器取出3-5ml的填料进行装柱用去离子水冲洗填料5个柱体积2.柱的平衡与上样:用 PB bufferA 缓冲液()平衡Ni柱直至流出液的pH为对处理的样品进行过滤后缓慢上样让蛋白充分结合3洗杂蛋白:用 PB bufferA 缓冲液(
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1. 4要求掌握的技术 柱层析技术 Sephadex G-25 分子筛层析 DEAE-Cellulose 离子交换层析 CHOM –Sepharose 4B 亲和层析 蛋白质提取技术 10TCA 提取鸡卵粘蛋白 乙酸pH 提取胰蛋白酶原
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Click to edit Master title styleClick to edit Master text stylesSecond levelThird levelFourth levelFifth level实验六:可溶性蛋白质的测定(考马斯亮蓝G-250法)1.实验原理 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种该染料在游离状态下呈红色最大光吸收在488n
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作业2:蛋白质的离子交换柱层析原理:蛋白质由氨基酸组成不同的氨基酸是具有不同的等电点的因此每个蛋白质都具有等电点不同的蛋白质其等电点也不相同这个决定了在同一pH下蛋白质所带的电性和电荷量是有差异的比如在pH在的情况下有些蛋白质带正电有些蛋白质带负电有些蛋白质不带电在带正电的蛋白质中不同的蛋白质所带的电荷量也是不同的带负电的蛋白质也是如此即使假设存在两种蛋白质所带的在同一pH下所带的电性和电荷量都相
拟南芥可溶性全蛋白的双向电泳前言双向电泳是一种分析从细胞、组织或其他生物样本中提取的蛋白质混合物的有力手段,已得到广泛应用。这项技术利用蛋白质的两种特性,分两步将不同的蛋白质分离。第一向步骤为等电聚焦(IEF),即根据蛋白质的等电点(pI)差异将蛋白质分离。第二向步骤为十二烷基硫酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-),即利用蛋白质的分子量(Mr, 相对分子量)差异将蛋白质分离。双向凝胶电泳结果
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柱层析技术 常说的过柱子应该叫柱层析分离也叫柱色谱我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相 的吸附柱由于柱分的经验成分太多所以下面我就几年来过柱的体会写些心得希望 能有所帮助 柱子可以分为:加压常压减压 压力可以增加淋洗剂的流动速度减少产品收集的时间但是会减低柱子的塔板数所 以其他条件相同的时候常压柱是效率最高的但是时间也最长比如天然化合物的分 离一个柱子几个月也是有的 减压柱能够减少硅胶的使用量
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