单击此处编辑母版标题样式 Western Blot单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质免疫印迹技术及常见问题分析张绍进Western Blot简介Western Blot一般流程Western Blot常
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质的检测与分析 ——Western bolt2008.61.原理转膜SDS-PAGEWestern Blot 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳区分不同的蛋白组分并转移至固相支持物 (例如NC膜等)上通过特异性抗体作为探针标记的二抗显色对靶蛋白含量进行检测2.材料2.1 仪器垂直板电泳槽电泳仪转移电泳槽(湿转)水平摇床冷冻离心机分光光
Western Blot原理显色分类及操作步骤 一 原理 与Southern或Northern杂交方法类似但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳被检测物是蛋白质探针是抗体显色用标记的二抗经过PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上固相载体以非共价键形式吸附蛋白质且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原与对应的抗体
一实验仪器、耗材、试剂及其配制1,实验仪器:恒温干燥箱,SANYO自动消毒锅,SANYO普通冰箱(4℃,-20℃):海尔超低温冰箱(-80℃):Thermo掌上离心机,其林贝尔低温离心机HITACH:CF-16RX,水浴锅,SANYO全波长分光光度计,上海UNICO酶标仪,Thermo凝胶成像仪,BIO-RAD垂直电泳槽,BIO-RAD湿式转膜槽,BIO-RAD封口机,上海麦尔多电子天平,威恒,
Western blot全过程1原理及目的:Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上然后利用抗体进行检测对已知表达蛋白可用相应抗体作为一抗进行检测对新基因的表达产物可通过融合部分的抗体检测Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳被检测物是蛋白质探针是抗体显色用标记的二抗经过PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上固相载体以非共价键形式吸
Western Blot原理:通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,通过分析着色的位置和着色的深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。将电泳分离后的细胞或组织蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。步骤:一、配置溶液:Resolve your samples on a SDS mini-gel
印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法1975年Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC膜)上并利用DNA-RNA杂交检测特定的DNA片段的方法称为Southern印迹法而后人们用类似的方法对RNA和蛋白质进行印迹分析对RNA的印迹分析称为Northern印迹法对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法对双向电泳
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 让我们把蛋白质看作具有独特而奇妙性质的实体Western blotting为什么要作蛋白质印迹实验研究一些体外的蛋白质分子寻找目的蛋白是否存在样品当中蛋白质的表达情况上调或下调表达在不同的样品中如疾病和正常的样品之间的表达差异性定义:印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上而后利用相应的探
WesternBlot应用-Western Blot 常见问题分析1. 可以非常有效的鉴定某一蛋白质(或表位)的性质结合免疫沉淀法可以用来定量分析小分子抗原 2. 表位作图3. 结构域分析4. 斑点印迹可用层析组分蔗糖梯度或脉冲追踪实验分析5. 功能实验中蛋白质复性6. 配基结合免疫印迹后多种配基可同蛋白质进行配基结合试验7. 抗体纯化8. 有膜上收获蛋白质条带制备抗体9. 氨基酸组成分析和序列分
Western blotting所需要试剂配方超纯水30AcrBic() (Ph=) (Ph=) 10SDS10AP(使用前加1000ul超纯水)转移缓冲液TBSTBSTTEMED甲醇吐温20样品上样缓冲液电转缓冲液Fermentas蛋白MakerPVDF膜脱脂奶粉一抗二抗试剂配制:(1)30AcrBic(29:1) 丙烯酰胺(Acr)29g甲叉双丙烯酰胺(Bic)1g超纯水至
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