Prey质粒与Bait质粒共转AH109(用于点对点)实验步骤:(1)AH109,-80℃冰箱,蘸取少许菌液划线于YPDA固体培养基上,30℃倒置培养2-4天;(2)挑 1mm 克隆(2-3个)接种于1ml YPDA液体培养基中,用枪仔细吹打,使菌分开,将其转移至50mlYPDA液体培养基,30℃振荡培养20小时(过夜),OD600达到12左右;(3)转移30ml菌液接入300ml(体积视转化
Conservation of replication timing reveals global and local regulation of replication origin activityHYPERLINK =Mx000fcller CA[auth]Carolin A. Müllerand HYPERLINK =Nieduszynski CA[auth]Conrad
酵母感受态细胞的制备及酵母转化酵母感受态细胞的制备转化规模YPDA 培养基平板上活化酵母菌小大文库接直径2-3ml的单克隆1个或多个于1ml YPDA 或SDa培养基中(最好选用四周之内的酵母菌落)涡旋打散菌体转移到表中右面所示体积的YPDA或SD培养基中50ml 50ml150ml30℃250rpm振荡培养16-18h至OD600大于1.5转移过夜培养的培养物于表中右面所示体积的YPDA中
目录介绍4试剂盒物品清单 7额外附加物品列表9酵母菌株11酵母载体14方法简述:单杂交文库的构建和筛选16方法简述:双杂交文库的构建和筛选17构建用于酵母单杂交的报告质粒载体18构建用于酵母双杂交的DNA-BD融合载体19构建生成cDNA文库21构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库(简述)27酵母单杂交文库的构建和筛选28酵母双杂交文库的构建和筛选30方法A:通过酵母配对(Yeast Mat
#
10 目录介绍4试剂盒物品清单 7额外附加物品列表9酵母菌株11酵母载体14方法简述:单杂交文库的构建和筛选16方法简述:双杂交文库的构建和筛选17构建用于酵母单杂交的报告质粒载体18构建用于酵母双杂交的DNA-BD融合载体19构建生成cDNA文库21构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库(简述)27酵母单杂交文库的构建和筛选28酵母双杂交文库的构建和筛选30方法A:通过酵母配对(Yeast
酵母双杂原理:酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。典型的真核生长转录因子, 如GAL4、4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列,并使转录激活结构域定位于所调节的基因的上游, 转录激活结构域可
酵母双杂筛库protocol一.BD的构建1构建BD质粒,并转化Y2HGOLD菌株。在SD/-Trp/Aba/X的培养基上筛选Aba浓度。2准备筛库用的BD质粒(6ug,体积10ul)Y2HGOLD 菌株转化Y2H gold菌株制作感受态制备酵母感受态(参照takara protocol)共转化酵母(感受态细胞600ul,BD质粒10ul,AD库质粒10ul(1mg/ml),变性的carrie
#
YPD: Difco peptone20 g/LYeast extract 10 g/L葡萄糖 20 g/LYPD固体: Difco peptone20 g/LYeast extract 10 g/L葡萄糖 20 g/LDifco Agar (for plates only) 20 g/L调pH至65,灭菌条件为高压1210C灭15 min(以下所涉及的需要加入碳源的培养基类型均与此相同)。Y
违法有害信息,请在下方选择原因提交举报