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变性梯度凝胶电泳(denatured gradient gel electrophoresisDGGE)最初是 Lerman 等人于20 世纪 80 年代初期发明的起初主要用来检测 DNA 片段中的点突变DGGE 是最灵敏的突变检测方法其效率可达99(Grompe 1993)Muyzer 等人在 1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究现在该技术已经发展成为研究微生物群落结构的主要分子生物学方
目标片段的PCR扩增环境样品基因组DNA的提取上样的胶孔要用去离子水冲洗干净并吸干PAGE胶装入电泳支架时注意用去离子水润滑橡胶垫装入后在胶孔中加入缓冲液上样时上样器要深入胶孔底部尽量在同一个胶上比较所有样品每一个胶上要有marker lane将胶放入电泳槽中时注意正负极建议低电压电泳一段时间在样品完全进入胶中之后再升电压图像的采集和条带的回收Quantity one的应用问题和讨论
第29 卷第 6 期
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44 卷 6 期
变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链称之为变性核酸50发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度5060 ℃变性剂0100当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm 值此区
变性梯度凝胶电泳变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度50~60 ℃,变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度
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