Transformation of Pichia pastoris GS115毕赤酵母电转化方法电穿孔法简便快速高效是理想的转化方法线性化质粒DNA对Pichia pastoris GS115的转化一 菌体的准备:(1)挑取酵母单菌落接种至含有5ml YPD培养基的50ml三角瓶中30℃250300rmin培养过夜YPD培养基配方:注意高温灭菌的温度1 L培养基:900 mL水中加入10 g Ye
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中国海洋药物杂志2010 年
在精编分子生物学实验指南上有一部分讲到了酿酒酵母,电转化具体过程如下:1)将转化用酵母菌株的单菌落接种于5ml YPD培养基中,30度过夜培养至饱和。2)转化前一天晚上,在装有500ml YPD培养基的2L无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液,于30度剧烈振摇,直到细胞密度达1*10的8次方(OD600约为13-15)。3)于4度4000g离心收获培养细胞,细胞用80ml无菌水重悬。为了增加细
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毕赤酵母表达实验手册大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单产量高生产成本低然而许多蛋白质在翻译后需经过翻译后的修饰加工如磷酸化糖基化酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式大肠杆菌缺少上述加工机制不适合用于表达结构复杂的蛋白质另外蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠是以包含体状态存在包含体的形成虽然简化了产物的纯化但不利于产物的
大肠杆菌表达系统最突出的优点是工艺简单、产量高、生产成本低。然而,许多蛋白质在翻译后,需经过翻译后的修饰加工,如磷酸化、糖基化、酰胺化及蛋白酶水解等过程才能转化成活性形式。大肠杆菌缺少上述加工机制,不适合用于表达结构复杂的蛋白质。另外,蛋白质的活性还依赖于形成正确的二硫键并折叠成高级结构,在大肠杆菌中表达的蛋白质往往不能进行正确的折叠,是以包含体状态存在。包含体的形成虽然简化了产物的纯化,但不利
毕赤酵母常用培养基与载体一、毕赤酵母表达常用载体: 典型的巴斯德毕赤酵母表达载体载体包含醇氧化酶-1(AOX1)基因的启动子和转录终止子(5'AOX1和3'AOX1),它们被多克隆位点(MCS)分开,外源基因可以在此插入。此载体还包含组氨醇脱氢酶基因(HIS4)选择标记及3'AOX1区。当整合型载体转化受体时,它的5'AOX1和3'AOX1能与染色体上的同源基因重组,从而使整个载体连同外源基
酵母转化原理:我们采用的是PEG LiAc法转化酵母PEG是一种高分子聚合物只有分子量达到3000 左右的PEG才会发挥最大的转化促进作用本文使用的PEG分子量为3350 实验结果表明促转化效果可以达到103105 cfuμg PEG在酵母转化中起到在高浓度醋酸锂环境中保护细胞膜减少醋酸锂对细胞膜结构的过渡损伤同时促进质粒与细胞膜接触更紧密PEG的浓度是务必适宜这一点很重要LiAc可使酵母细胞产生
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