实验八 DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白实验目的1 掌握DEAE纤维素离子交换层析法分离血清蛋白的原理与方法。 2 熟悉762紫外分光光度计的使用。思考题DEAE离子交换层析根据什么原理分离蛋白质?为什么要预处理DEAE?什么叫阳离子交换剂?阴离子交换剂?通过DEAE纤维素32离子交换层析法分离血清蛋白所得收集液第一个蛋白高峰主要是哪一种蛋白?为什么?实验原理离子交换层析是依据各种离子或离
掌握血清白蛋白分离纯化的方法学会用盐析和离子交换柱层析法分离纯化蛋白质的原理与操作学习检测蛋白质纯度的方法.留样:1在离子交换层析中蛋白质对离子交换剂的结合力取决于彼此之间相反电荷基团的静电吸引而这又和溶液的pH与盐离子浓度有关因此蛋白质混合物的分离可以由改变溶液中盐离子浓度和pH来完成对离子交换剂结合力最小的蛋白质首先从层析柱中洗脱出来三血清白蛋白纯度测定12分离胶总体积
作业2:蛋白质的离子交换柱层析原理:蛋白质由氨基酸组成不同的氨基酸是具有不同的等电点的因此每个蛋白质都具有等电点不同的蛋白质其等电点也不相同这个决定了在同一pH下蛋白质所带的电性和电荷量是有差异的比如在pH在的情况下有些蛋白质带正电有些蛋白质带负电有些蛋白质不带电在带正电的蛋白质中不同的蛋白质所带的电荷量也是不同的带负电的蛋白质也是如此即使假设存在两种蛋白质所带的在同一pH下所带的电性和电荷量都相
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级凝胶过滤层析法分离血红蛋白化学生物学实验药学院 化学生物学教研室1.实验目的初步了解凝胶过滤层析法的简单原理及应用初步掌握应用凝胶过滤法分离蛋白质 1 22.实验原理 层析法是利用混合物中各组分物理经学性质的差别(如吸附力溶解度分子形状大小和极性等)
移动方向:血清蛋白中含有清蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白β-球蛋白 γ -球蛋白等各种蛋白质由于立体构象分子量等电点及形状不同在电场中的迁移速度不同血清蛋白的PI均小于在pH=的巴比妥缓冲液中都带负电荷电泳时向正极移动由于迁移率不同而被分离注意事项
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第 九 章 离子交换层析法仪器设备简介离子交换全套装置第 九 章 离子交换层析第一节 离子交换层析基本原理第二节 离子交换剂的分类与性质 第三节 离子交换剂与缓冲液的选择第四节 离子交换拄层析操作方法第五节 离子交换拄层析应用第一节 离子交换层析基本原理一离子交换剂的组成结构及其的特性 二离子交换剂的选择性 三离子交换柱
实验目的2009年秋季学期 溶解度2009年秋季学期?1相对分子量(×104)清蛋白不沉淀上清9R-NR3OH- Pr - 带正电荷14取血清边摇边缓慢滴加饱和硫酸铵溶液混匀室温放置10min4000rmin离心10minBaCl2检测SO42-阴性用23ml NH4AC缓冲液再生平衡离 子 交 换 柱 层 纯 化过DEAE-纤维素层析柱(×6cm)五注意事项8cm样品标记γ-
特种树脂-NH2 -NHR -NR2 树脂4阴离子交换树脂1)强碱型阴离子交换树脂F-<OH-<CH3COO-<HCOO-<Cl-<NO2--<Br-<C2O42-<NO3- < HSO4-<I-<CrO42-<SO42-<柠檬酸根2)弱碱型阴离子交换树脂F-<Cl-<Br<I-<CH3COO-<MoO42-<PO43-<AsO43-<NO3-<酒石酸根<CrO42- <SO42- <OH-
离子交换层析(色谱)一原理 离子交换层析(Ion exchange chromatography IEC)是利用离子交换剂为固定相根据荷电溶质与离子交换剂之间静电相互作用力的差别进行溶质分离的层析法荷电溶质在离子交换剂上的分配系数可用下式表示:I — 流动相的离子强度A和B为常数 为离子强度无限大时溶质的分配系数是静电相互作用以外的非特异性吸附引起的溶质在离子交换剂上的分配离子
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