细菌感受态的制备和质粒的转化实验目的 通过实验学会感受态细胞的制备方法和DNA转化的最基本操作以及如何提高转化效率的思路本实验综合因素较多难度较大是分子生物学中的一个很关键的实验手段实验原理 转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA而导致其原来的遗传性状发生改变这种遗传性状包括遗传型和表型的改变 感受态是受体菌能接受外源DNA能力的一种生理状态用CaCl2处理细菌改变细胞膜的
感受态细胞制备和细菌的转化大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备从冻存管中挑取细胞在LB培养基平皿上划线接种后过夜培养挑取单克隆菌落至5 ml LB培养基中37℃220 rmin振荡培养过夜把菌液按1:100(视浓度而定)转接入50 ml LB液体培养基内37℃ 200 rmin培养至OD600≈ (大约3小时)此时菌液呈现半透明云雾状把菌液冰浴冷却10-15 min于4 ℃4000 rmin离心10
Click to edit Master title Click to edit Master textSecond levelThird levelFourth levelFifth levelexperiments of molecular biology 感受态细胞的制备及重组质粒的转化 experiments of molecular biology 重组DNA技术分:分离外源基因目的基因
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化(原理感受态细胞的概念重组DNA分子体外构建完成后必须导入特定的宿主(受体)细胞使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化在原核生物中转化是一个较普遍的现象在细胞间转化是否发生一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系 1 感受态细胞的概念所谓的感受态即指
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节 概 述 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。 转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传
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农杆菌感受态细胞的制备[实验原理]在利用根癌农杆菌介导的基因转化中,首先要获得含有目的基因的农杆菌工程菌株。在基因工程操作中,感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。农杆菌的感受态可用CaCl2处理而诱导产生。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl2溶液中,0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变,此时的细胞呈现出感受态。制备
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第三章 大肠杆菌 =25typeid=298 t _blank 感受态细胞的制备和转化 第一节 概 述 在自然条件下很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内但在人工构建的质粒 =8 载体中一般缺乏此种转移所必需的mob基因因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移如需将质粒 =8 载体转移进受体细菌需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA 转化(Tran
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节 概 述在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的 mob 基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源 DNA。转化(Transformation)是将外源 DNA 分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的
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