单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级Joining to vectorsThe insertion and linking of DNA frangments into plasmid vectors can be achieved by several methods.Treatment of mixtures of DNA fragments with E.

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级2010-7-26??目的基因的获取目的基因的获取PCR扩增pMD19-T载体连接TG1感受态制备重组载体1TG1感受态细胞转化转化细胞1抽取质粒进行电泳PCR检测阳性pET-28a载体酶切获取目的基因(阳性)转化细胞1重组重组载体2原核表达技术流程重组载体2BL21感受态转化转化细胞2抽取质粒进行电泳PCR检测阳性目的蛋白诱

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级11 重组DNA技术11.1 重组DNA技术是基因工程的核心技术11.2 获得需要的目的基因(外源基因)11.3 构建重组质粒和基因克隆11.4 转化受体细胞和转化子的筛选11.5 转化子的分析——Southern杂交重组DNA技术又称为基因克隆或分子克隆技术克隆(clone)---无性繁殖分子克隆– DNA的无性

注意事项1. 在进行克隆时Vector DNA和Insert DNA的摩尔比一般为：1: 210在本制品中pMD18-T Vector 1 μl (50 ng) 的摩尔数约为0.03 pmolControl Insert DNA 1μl (50 ng) 的摩尔数约为0.15 pmol 2. 克隆时使用的Insert DNA片段 (PCR 产物) 尽量进行切胶回收纯化PCR产物中的短片段DNA

大肠杆菌(E.coli)超级感受态细胞制备H. Inoue H.Nojima and H. Okayama (1990) High efficiency transformation of Escherichia coli with plasmids. Gene 96:23-28溶液：SOB培养基 1L

酶切位点保护碱基-PCR引物设计用于限制性内切酶发布: 2010-05-24 20:19　 来源:生物吧 编辑:刘浩 查看: 161 次??本文给出了分子克隆中常用限制性内切酶的保护碱基序列如AccIAflIIIAscIAvaIBamHIBglIIBssHIIBstEIIBstXIClaIEcoRIHaeIIIHindIIIKpnIMluINcoINdeINheINotINsiIPac