农业生物技术学报 J
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蛋白酶活性的测定方法(GB/T23527-2009)1 原理 蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷物蛋白等都有很好的水解作用。磷钨酸和磷钼酸混合试剂,即福林-酚试剂,碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钨兰和钨兰混合物)。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸),因此,蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋白酶分解酪素(底物)生成含酚基氨基酸的呈色反应,来间接测定蛋白
中国组织工程研究第
# 248#免 疫
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上然后利用抗体进行检测对已知表达蛋白可用相应抗体作为一抗进行检测对新基因的表达产物可通过融合部分的抗体检测本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一原理二?分类i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物 =78 t _blank 荧光ECFiv.底物DAB呈色三?主要试剂四?主要步骤五?
Western Blot为什么必须要用内参[心得点评] 要检测一个基因的表达产物是否正确或者比较表达产物量的相对变化首选方法是Western Blot因为Western Blot操作相对简单方便既可以定性分析表达产物同时还可以指示目的蛋白量的相对变化虽然顺利的时候Western Blot做起来很简单可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦假阳性啦结果出现多条带啦到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……
SDS-PAGE电泳及Western blot分析 ⑴试剂溶液的配制30的丙烯酰胺(Acr):丙烯酰胺29g双丙烯酰胺 1g加灭菌蒸馏水定容至100ml37℃加热使溶解4℃避光保存如果有杂质可过滤成层胶缓冲液:Tris gSDS g先用50ml灭菌蒸馏水溶解再用浓盐酸调pH值至定容至100ml4℃保存分离胶缓冲液:Tris gSDS g先用50ml灭菌蒸馏水溶解再用浓盐酸调pH值至定容至1
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