园 艺 学 报 2001, 2
#
生物技术综合实验蔗糖酶蔗糖酶的耐热温度为50度45度以下可保持酶活不变在范围内均可保持较高的酶活蔗糖酶的活性中心有巯基因此在提取时应防止其被氧化或者加入还原剂(如Vc)保持酶活力酵母细胞存在两种蔗糖酶一种在细胞壁中一种在细胞质内前者活力较高分子量较大(约270KDa)后者活力较低分子量约为135KDa两种酶的底物专一性和动力学性质十分相似因此本实验未区分内酶与外酶-测定组
#
蔗糖酶的测定:酶液制备:称取左右棉花材料加入5ml0℃左右的磷酸—柠檬酸缓冲液[PH—]碾磨在冰浴中提取小时然后在4℃223离心20min收集上清液磷酸—柠檬酸缓冲液[PH—]母液:A )柠檬酸溶液(溶于1000ml)B)磷酸氢二钠溶液( )或 溶于1000ml)A):x ml B):y ml稀释到100ml PH— x= y=酶活性测定: 以蔗糖为底物反应总体积为[含1mlpH 的磷酸——柠
土壤蔗糖酶测定(比色法)1. 方法选择及原理 蔗糖酶能酶促蔗糖水解生成葡萄糖和果糖蔗糖酶活性的测定方法有用酶学的方法测量所产生的葡萄糖(滴定法或重量法)或是根据蔗糖的非还原性用生成物(葡萄糖和果糖)能够还原菲林溶液中的铜再根据生成的氧化亚铜的量求出糖的含量也可根据蔗糖水解的生成物与某种物质(35-二硝基水杨酸或磷酸铜)生成有色化合物进行比色测定还有一种方法根据蔗糖液酶促反应前后光偏振面的变化
蔗糖酶米氏常数的测定 【目的】:了解底物浓度与酶反应速度间的关系,学习求蔗糖酶米氏常数的方法【原理】:米氏方程式 v = Vmax[S]Km +[S]式中,Vmax为最大反应速度,Km为米氏常数。米氏常数的求法很多,最常用的是LineweaVerBurk的作图法(双倒数作图法)。将米氏方程式改写为下列倒数形式:1/V=Km/Vmax·1/[S]+1/Vmax实验时,选择不同的[s],测定相应的v,
#
#
向烧杯中的级分II 加入等体积 95乙醇搅拌冰浴10min 4度10000rpm离心15min弃去上清倒置于抽纸上沥干沉淀等量分装于两个的EP管中4℃保存做为下两次实验中的酶 (级分III)醋酸缓冲液葡萄糖标准曲线的制备 NaOH溶液℃水浴 参照蛋白质浓度标准曲线(预制)计算出各级分蛋白质含量y= X代表溶液的浓度(mgml)Y代表595nm下的吸收值
违法有害信息,请在下方选择原因提交举报