凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number: For Research Use OnlyStore at -20℃ for one yearExpire date: 一、?? 试剂盒说明 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白,提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性,并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel sh
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number: For Research Use OnlyStore at -20℃ for one yearExpire date: 一、?? 试剂盒说明 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白,提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性,并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel sh
总蛋白提取试剂盒 (Total Protein Extraction Kit)P1250:蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提 100 extractions)描述:从组织细胞中提取总蛋白是Western Blot的关键步骤实体软组织如脑脊髓富含磷脂神经血管含大量结缔组织而脂肪则有大量油脂常规的方法难以有效从这些组织提取蛋白本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整的解决方案用裂解-结合缓
提取细胞蛋白吸出瓶内液体使用刮刀刮掉培养瓶上吸附的细胞 PBS清洗一次转移至EP管中 离心3000rpm 6min(上层:厌氧液 下层:细胞)弃上清 加入裂解液(裂解液:1:100蛋白酶抑制剂PMSF)冰上 30min每5min震荡一次离心 12000rpm 10min(上层:细胞成分 下层:细胞骨架(弃))取上清加入buffer 煮10min保存 : : :
细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式一种是在强启动子条件下的高效表达由于蛋白的过度表达使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲以固体颗粒的形式堆积于胞间质中这就是所说的包涵体另外一种是间质内的可溶性表达即可以发生正常折叠具有生物活性一般情况下细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体和可溶性表达的蛋白分离开 超声破碎的条件一般是300w10s10s20分钟具体条件可根据自身情况而定 超
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细胞质与细胞核蛋白提取方法裂解液A:裂解液B:HEPES 10mmolL 20mmolL 1mmolLDTT 甘油5甘油 25EDTA PMSF (使用前加入)1mmolLPMSF (使用前加入)aprotinin 3mgLaprotinin 5mgLleupeptin 3mgLleupeptin 5mgLpepstainA 2mgLpepstainA 3mgL注意:红色斜体字成分可用蛋白酶抑
原核蛋白的提取构建的原核表达载体转化BL-21或者Rosetta表达菌株,用保存的菌液或者单克隆接在相应抗性的LB培养基中,37℃过夜培养将小摇的菌株接在250ml LB中,使OD达到01,加入对应抗生素。28℃摇菌,约2到3个小时后,待OD达到06时,用IPTG(02mM到2mM)诱导蛋白表达。同时加入40%葡萄糖溶液2~5ml,放入30/28/18℃摇床生长注意,接大摇时,LB体积应小于四
构建的原核表达载体转化BL-21或者Rosetta表达菌株,用保存的菌液或者单克隆接在相应抗性的LB培养基中,37℃过夜培养将小摇的菌株接在250ml LB中,使OD达到01,加入对应抗生素。28℃摇菌,约2到3个小时后,待OD达到06时,用IPTG(02mM到2mM)诱导蛋白表达。同时加入40%葡萄糖溶液2~5ml,放入30/28/18℃摇床生长注意,接大摇时,LB体积应小于四分之一的三角瓶
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