1.挑取一DH5α单菌落于5ml LB培养液中37℃过夜培养 11. 倒置平板于37 ℃培养12-16个小时
实验仪器材料与试剂感受态细胞长时间处在常温状态会严重影响到其转化率因此应尽量减少常温操作动作要迅速为减少对细胞的机械损伤操作时动作不能剧烈尽量在无菌状态下操作减少污染的可能
感受态细胞制备:所谓感受态是指受体细胞处于容易吸收外源DNA的一种生理状态可以通过物理与化学方法诱导形成也可以自然形成在基因工程技术中通常采用诱导的方法用于转化的受体菌细胞一般是限制-修饰系统(Restriction-Modification)缺陷的变异株以防止对导入的外源DNA的切割用符号R-M-表示
大肠杆菌感受态细胞的制备发布日期:2010-04-29?? 发布人:technew?? 最后更新时间:2010-04-29?? 浏览次数:346 感受态细胞的制备(无菌操作):1)从新鲜培养的LB平板上挑单个DH5α大菌落接种到3 mL LB培养液中(2)37℃剧烈振荡(210-240rmin)培养过夜(3)2)取1mL过夜培养物 接种到含100mL LB培养液的500 mL锥瓶中37℃剧烈振荡直
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实验五 大肠杆菌感受态的制备(CaCl2法) 1. 实验目的2. 实验原理3. 实验仪器材料与试剂4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论实验目的 学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞实验原理用于感受态细胞制备的大肠杆菌菌株一般是限制-修饰系统缺陷的变异株即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株受体细胞经过一些特殊方法(如:电击法C
CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞原理:转化(Transformation):将外源DNA分子引入受体细菌使之获得新的遗传性状受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-M-)可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代受体细胞经过一些特殊方法如电击或CaCl2RbClKCl等化学试剂的处理后细胞膜的通透性增高成为感受态细胞penent cells)使
CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞 原理: 转化(Transformation):将外源DNA分子引入受体细菌使之获得新的遗传性状 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-M-)可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代受体细胞经过一些特殊方法如电击或CaCl2RbClKCl等化学试剂的处理后细胞膜的通透性增高成为感受态细胞penent?c
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化(原理感受态细胞的概念重组DNA分子体外构建完成后必须导入特定的宿主(受体)细胞使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状这个导入过程及操作统称为重组DNA分子的转化在原核生物中转化是一个较普遍的现象在细胞间转化是否发生一方面取决于供体菌与受体菌两者在进化过程中的亲缘关系另一方面还与受体菌是否处于一种感受状态有着很大的关系 1 感受态细胞的概念所谓的感受态即指
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第一节 概 述 在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人工构建的质粒载体中,一般缺乏此种转移所必需的mob基因,因此不能自行完成从一个细胞到另一个细胞的接合转移。如需将质粒载体转移进受体细菌,需诱导受体细菌产生一种短暂的感受态以摄取外源DNA。 转化(Transformation)是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传
转化方法:电击法 CaCl2 RuCl等化学试剂法感受态细胞:的处理后细胞膜的通透性发生变化成为能容许外源 DNA 分子通过时细胞的状态转化细胞(转化子):带有异源 DNA 分子的受体细胞( Transformant ) 含Amp培养基超净工作台恒温培养箱实验步骤
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