免疫标记技术 用可以微量检测的标记物(示踪物质)标记抗原或抗体,作为试剂,与相应抗体或抗原结合反应后,测定抗原抗体复合物中的标记物,从而推断所测抗体或抗原有无及量的多少。免疫标记技术 =免疫技术+ 标记技术酶荧光素同位素常 用 标 记 物荧光素酶同位素胶体金可发光化学物质试验命名: 根据标记物命名 如:免疫荧光技术 免疫酶技术等第七章 荧光免疫技术( fluoroimmunoassay )(P61
免疫学实验2-----免疫荧光技术 实验目的 初步掌握免疫荧光技术的原理一般操作步骤及结果的观察方法Principle : antigen antibodyTwo necessary conditions: specificity visibilityAg-A
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第四军医大学基础部病理学教研室免疫荧光细胞化学技术 免疫荧光细胞化学是现代生物学和医学中广泛应用的技术之一是由Coons等(1950)建立免疫荧光技术与形态学技术相结合发展成免疫荧光细胞(或组织)化学 它与葡萄球菌A蛋白(SPA)生物素与卵白素植物血凝素 (ConA等)相结合拓宽了领域与激光技术电子计算机 扫描电视和双光子显微镜等技术结合发展为定量免疫荧光细胞化学技术荧光激活细胞分类器 (FA
第四章免疫荧光细胞化学技术免疫荧光细胞化学技术(immunofluorescencecytochemistry) 采用荧光素标记的已知抗体或抗原作为探针,检测待测细胞或组织内的靶抗原或抗体,形成带有荧光素的抗原抗体复合物。利用荧光显微镜观察标本,根据组织细胞中荧光物质的存在,确定抗原或抗体的性质并定位,以及利用定量技术测定含量。荧光抗体法:用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法。 较常用荧光抗原法:用
免疫荧光组化技术主要内容一、荧光的特征二、荧光素三、荧光素标记抗体的方法四、荧光抗体的质量鉴定五、免疫荧光组化染色方法六、荧光显微镜七、非特异性荧光的消除方法八、激光扫描共聚焦显微镜思考题:1什么叫荧光?2常用荧光素有哪些特征?3免疫荧光组化直接法、间接法的原理和主要操作流程?4观察荧光组化片时应注意哪些问题?5非特异性荧光的消除方法有哪几种?一、荧光的特征分子都含有
免疫荧光protocol固定:用4的多聚甲醛(PFA)在室温下固定15min用PBS洗三次每次5min用封闭液(5BSA-triton定位于细胞浆和细胞核的蛋白要用triton封闭液用PBS配制即可)在室温下封闭1h移除封闭液加入一抗(一抗用1BSA稀释)置于4度孵育过夜用PBS洗三次每次至少5min(这样背景没那么深)加入二抗(1:1001:200二抗用1BSA)在室温下避光孵育1h(1h-2h
活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备(一)制备活性高的细胞悬液(培养细胞系外周血单个核细胞 胸腺细胞脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×1061×107/ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(550μl)
免疫荧光(IF法)检测技术.doc :
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