免疫荧光组化技术主要内容一、荧光的特征二、荧光素三、荧光素标记抗体的方法四、荧光抗体的质量鉴定五、免疫荧光组化染色方法六、荧光显微镜七、非特异性荧光的消除方法八、激光扫描共聚焦显微镜思考题:1什么叫荧光?2常用荧光素有哪些特征?3免疫荧光组化直接法、间接法的原理和主要操作流程?4观察荧光组化片时应注意哪些问题?5非特异性荧光的消除方法有哪几种?一、荧光的特征分子都含有
免疫学实验2-----免疫荧光技术 实验目的 初步掌握免疫荧光技术的原理一般操作步骤及结果的观察方法Principle : antigen antibodyTwo necessary conditions: specificity visibilityAg-A
免疫荧光protocol固定:用4的多聚甲醛(PFA)在室温下固定15min用PBS洗三次每次5min用封闭液(5BSA-triton定位于细胞浆和细胞核的蛋白要用triton封闭液用PBS配制即可)在室温下封闭1h移除封闭液加入一抗(一抗用1BSA稀释)置于4度孵育过夜用PBS洗三次每次至少5min(这样背景没那么深)加入二抗(1:1001:200二抗用1BSA)在室温下避光孵育1h(1h-2h
活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备(一)制备活性高的细胞悬液(培养细胞系外周血单个核细胞 胸腺细胞脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×1061×107/ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(550μl)
试剂固定液: 称取2g多聚甲醛(Sigma),加入5ml 10×PBS、30ml去离子水,置于65℃水域加热溶解1~15小时(搅拌加速溶解),待溶解完全后冷却至室温,加入5g蔗糖,待蔗糖溶解完全后,加去离子水至50ml,混匀,4℃保存1×PBS:将10×PBS用去离子水稀释10倍,高温高压灭菌,室温保存渗透液:10×PBS 10ml,20% TritonX-100 05ml,加去离子水至100
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence IFA)基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上直接与相应抗原反应其优点是方法简便特异性高非特异性荧光染色少缺点是敏感性偏低而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体此法常用于细菌
免疫标记技术 用可以微量检测的标记物(示踪物质)标记抗原或抗体,作为试剂,与相应抗体或抗原结合反应后,测定抗原抗体复合物中的标记物,从而推断所测抗体或抗原有无及量的多少。免疫标记技术 =免疫技术+ 标记技术酶荧光素同位素常 用 标 记 物荧光素酶同位素胶体金可发光化学物质试验命名: 根据标记物命名 如:免疫荧光技术 免疫酶技术等第七章 荧光免疫技术( fluoroimmunoassay )(P61
免疫荧光(Immunofluorescence IF)实验方法免疫荧光技术是在免疫学生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术它是根据抗原抗体反应的原理先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)利用 HYPERLINK t _blank 荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织从而确定抗原或抗体的性质和定位以及利用定量技
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