转基因实生苗石蜡切片的制作与染色1.固定 组织固定即杀死并保存组织内细胞的形态结构及组成使其与生活时相似本实验采用FAA固定液(70乙醇:冰醋酸:福尔马林90:5:5)分别固定若干野生型和转基因实生苗的叶片幼茎和老茎34d中间换一次固定液2.冲洗冲洗目的是除去材料中的固定液本实验采用70酒精洗涤法材料取出后直接投入适度酒精的小瓶中材料与酒精体积比为1:10左右开始换洗两次分别30min和60
第一天一、脱水7:00-9:00 从FAA中取出材料在50ml烧杯(70%酒精)中洗涤并按大小分级;转至离心管4ml 脱水2h9:00 -11:00 85%11:00-13:0095%13:00-14:30100%14:30-16:00 100%二、透明16:00-18:00 1:1=酒精:二甲苯 18:00-19:30 二甲苯19:30-21:00二甲苯 准备融蜡 体积=离心管数*2三、浸蜡
石蜡切片法的一般流程为:取材→固定→抽气→ =SE6B497E6B6A4ch== t _blank 洗涤→脱水→透明→浸蜡→包埋→修块→切片→粘片→染色→封片.(一)取材 用锋利的 =SE58880E78987ch== t _blank 刀片切取新鲜的植物材料选定适宜的材料立即固定. 取材的注意事项如下: (1)取材料要新鲜.动作要迅速以免挤压损坏组织取病理材料时应设
叶片解剖结构观察(石蜡切片法) 1取材成熟的叶片通常茶树新梢发育到一芽三四叶时鱼叶上第一或第二张叶才成熟茶树新梢发育较为整齐取样标准为待春梢一芽四至六叶完全展开时取鱼叶上发育正常的第二叶一般选三个不同新梢每个新梢上取一片则为三个重复[1]2步骤[2]:石蜡切片的过程:固定→洗涤→脱水与硬化→脱酒精→包埋→切片→粘片→脱蜡→染色→脱水→透明→封胶2.1 FAA固定:每张叶片沿中脉切成长79mm宽5
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四注意事项 透明的注意事项 使用透明剂时要随时盖紧盖子以免空气中水分进入 更换透明剂动作要迅速 材料周围出现白色雾状应退回纯酒精中重新脱水 透蜡的注意事项 动物材料常用的石蜡熔点为52-56oC植物材料为54-60oC 透蜡温度要恒定不可忽高忽低 包埋的注意事项 包埋前应先把必需的用具(恒温箱温台纸盒)准备好 包埋用的镊子要先放在温箱中预热
实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液:美蓝(Methylene blue) 03 克95%酒精 毫升B液:氢氧化钾(KOH) 001 克蒸馏水 100 毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液:碱性复红(Basic fuchsin) 03 克95%酒精 10O 毫升B液:石炭酸(苯酚) 50 克蒸馏水 95 毫升将
幼苗用去离子水冲淋干净后,选下胚轴中部切取5 mm长的小段,FAA(福尔马林、70%酒精、冰醋酸混合液)固定液中固定,4℃冰箱中保存备用。常规石蜡制片,番红、固绿对染法:固定-脱水-透明-浸蜡-包埋-切片-粘片-脱蜡-复水-番红、固绿染色-封片切片厚度为10 μm,5%明胶粘片,阿拉伯树胶封片,Axiaskop 40型显微镜下观测并摄影。1取材、固定:幼苗用去离子水冲淋干净后,选下胚轴中部切取
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常规石蜡切片法,试验流程:(1)固定:FAA固定液固定甘草小花;(2)脱水:经70%、83%、90%、95%乙醇(各一次),100%乙醇(2次),间隔2小时;(3)透明:二甲苯作为透明剂,经1:1无水乙醇和二甲苯(1次),纯二甲苯(2次);(4)浸蜡:常温(烘箱36℃)浸蜡12小时;高温(60℃)浸蜡,换纯蜡3次,每次间隔15小时;(5)包埋:用小纸盒进行包埋;(6)切片:修蜡块后,用切片机切
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